目前，国际上已有研究组通过计算机辅助和生物学实验结合的方法筛选出一些IGF1R的特异性抑制剂，这为进一步的特异性IGF1R抑制剂计算机虚拟筛选研究提供了良好的基础。通过计算机虚拟筛选进行针对特定靶标的药物分子筛选，可以极大地降低成本，提高生物实验准确率，缩短药物研发时间。在本文工作中，我们通过测试和比较多种分此网站子对接软件在IGF1R和若干与IGF1R的结构高度相似的激酶受体上的表现，建立了一套虚拟筛选流程，用来快速筛选潜在的IGF1R特异性抑制剂。同时我们通过对结构已知的IGF1R和IR复合体进行多种分析，建立了一套靶标和小分子结合模式预测流程，用来预测和分析潜在的抑制剂小分子对IGF1R半抑制浓度和IR相互作用的差别。我们构造了多种有效的测试数据集验证了两个流程的有效性。进一步地，我们应用这些计算机流程，从美国国家癌症研究所（NCI）发布的小分子数据库所包含的大约14万个化合物中，检测出17个潜在的IGF1R特异性抑制剂。我们挑选其中的三个潜在性抑制剂分子(ID:351570selleck screening library、660826、649812)进行了分子动力学模拟分析，通过计算平均作用力势能（PMF）来估计它们对IGF1R和IR结合力的差别，最后确定了其中的化合物351570和649812最有可能成为IGF1R特异性抑制剂。NCI的研究证明了化合物649812和660826具有对多种癌细胞系的抑制作用。上述化合物对IGF1R特异抑制能力的最后定论还有待进一步的生物学实验证实。

采用TCID50（Tissue cell infectious dosage50，TCID50）法测定重组腺病毒滴度。重组腺病毒分别经酶切和PCR等方法进行鉴定。荧光显微镜观察转染效果。研究结果:证实腺病毒载体中含有NK4基因的目的片段；病毒滴度为6.3×108PFU/ml；荧光显微镜发现该重组腺病毒能在HEK293细胞中高效的表达Tenofovir分子量。结论:利用Gateway技术可以快速地构建同时表达NK4蛋白和绿色荧光的重组腺病毒，为下一步开展关于NK4基因的肿瘤治疗提供了基础。 第二部分Ad-NK4对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖的影响 研究目的:观察Ad-NK4对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖的影响及可能机制。研究方法:1. WeSelleck Decitabinestern blot和RT-PCR检测在转染Ad-NK4的RPMI8226细胞中NK4的表达。2.MTT法体外观察Ad-NK4对RPMI8226细胞增殖抑制作用。3. PI单染流式细胞仪检测Ad-NK4对RPMI8226细胞凋亡发生率的影响。4. DNA琼脂糖凝胶电泳实验验证Ad-NK4对RPMI8226细Staurosporine浓度胞的诱导凋亡作用。5. Western blot检测Akt/mTOR通路主要执行蛋白、细胞周期调控蛋白及细胞凋亡相关蛋白的表达。研究结果:1.Ad-NK4转染的RPMI8226细胞组中NK4基因的表达明显高于对照组。2. Ad-NK4转染的RPMI8226细胞组在24、48和72小时的增殖抑制率分别为33.5%±1.21%、52.8%±1.63%和54.8%±1.77%（p<0.05）。

本论文的引言部分重点介绍了抗生素的最新研究进展,发展新作用机制抗生素的重要性,以及PDF抑制剂的作用机制和发展现状等研究背景。LBM415是第一个进入临床研究的PDF抑制剂,相对于稍后进入临床研究的PDF抑制剂BB83698, LBM415具有更好的抗菌活性。本论文的第二部分,我们以LBM415为先导化合物,首先进行了P3′部位构效关通常系的研究,发现在P3′部位引入杂环芳胺时产物的抑菌效果最好。在此基础上,我们尝试将LBM415分子中P2′位的L-脯氨酸以(2S,3aR, 7aS)-八氢吲哚-2-羧酸替换,并在P3′部位引入不同的杂环芳胺,成功设计并合成了6类新型的抑制剂,并进行了体外抗菌活性研究。研究结果表明用(2S,3aR,7aS).八一般氢吲哚-2-羧酸取代L-脯氨酸所得的PDF抑制剂活性较差,可能是由于八氢吲哚过大的空间位阻降低了该类PDF抑制剂与PDF酶的结合能力,造成抑菌能力的降低。鉴于过大的空间位阻可能会降低药物与PDF酶的结合能力,在本论文的第三部分,我们尝试降低P2′部位官能团的空间位阻,同时通过向LBM415分子P2′部位的L-selleck screening library脯氨酸中引入氟原子,希望通过氟原子的引入,提高药物分子的细胞膜通透性,进而提高药物抑菌活性。引入氟原子后所得的PDF抑制剂抗菌活性较(2S,3aR, 7aS)-八氢吲哚-2-羧酸类PDF抑制剂抗菌活性有明显提高,但相对LBM415来讲,引入氟原子后其抑菌活性有所下降,其原因可能是氟原子的强吸电子能力降低了P2′两侧氧原子及氮原子与肽脱甲酰基酶残基上活泼氢成氢键的能力,造成抑菌能力的降低。

第一代ALK酪氨酸激酶抑制剂Crizotinib可以有效地针对这些肿瘤在NSCLC个体化靶向治疗中发挥重要作用。随机III期临床研究对比了Crizotinib和二线标准化疗方案治疗ALK阳性晚期NSCLC患者的疗效,提示Crizotinib治疗ALK阳性的晚期NSCLC患者疗效明显、耐受性好。然而,尽管治疗初期有较好的疗效,但大部分患者持续用药后会出现获得性耐药。因此,一些确认细节针对ALK阳性的NSCLC患者的新治疗策略在临床试验中逐步开展,包括第二代ALK抑制剂,比如LDK378、CH5424802(RO5424802)和AP26113等,以及其他靶点抑制剂如热休克蛋白90抑制剂等。本文就ALK阳性NSCLC患者的治疗进展以及最新药物临床研究做一综述。
ROS1融合基因是在2007年由科学家们[1,2]通过应用络氨酸激selleck化学酶蛋白组学技术从一个肺腺癌患者肿瘤组织中筛选肿瘤致癌基因时与赖皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因同时被发现的另一个融合基因。作为新的独特分子亚型代表,ROS1融合基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中发生率约为1%~2%,远远低于EGFR基因突变率和ALK基因重排变异率(分别为10%~40%,3%
肺癌是最常见的恶性肿瘤之获悉更多一,ROS1基因是新近发现的出现在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的原癌基因,它编码的蛋白是受体络氨酸激酶超家族成员之一,是一种对细胞生长和生存起着重要作用的蛋白。越来越多的研究表明,ROS1基因的改变是NSCLC个体化治疗的一个新的分子靶点。本文将重点综述ROS1的重排在NSCLC的特点、ROS1基因重排的检测方法,以及NSCLC中以ROS1重排基因作为药物靶点的研究进展。

研究慢病毒介导的Bcl-2基因RNAi联合TRAIL基因表达对于淋巴瘤细胞生长抑制、凋亡诱导作用,评价Bcl-2基因表达下调和TRAIL表达上调抗淋巴瘤生长的协同效应,探索携带TRAIL基因和Bcl-2shRNA的重组慢病毒对淋巴瘤细胞的旁观者效应。 主要内容： 第一部分：慢病毒表达载体pWPI-trail/bcl-2-shRNA的构无建 方法： 1.将bcl-2-shRNA寡核苷酸片段退火,产物插入pLL3.7慢病毒表达载体mU6启动子下游,筛选阳性菌落,构建pll-bcl-2-shRNA慢病毒表达载体。 2.提取人胎盘组织总RNA, RT-PCR扩增TRAIL cDNA,克隆至pGM-T克隆载体,筛选阳性菌落,酶切及测序鉴定pGM-T-Gemcitabine细胞系trail的构建；将TRAIL基因从pGM-T-trail克隆载体上切下,并克隆至pWPI慢病毒表达载体EF-1α启动子下游(IRES-GFP上游),筛选阳性菌落,构建pWPI-trail慢病毒表达载体。 3.从pll-bcl-2-shRNA质粒上获取mU6/bcl-2-shRNA表达盒,克隆至pWPI-trNSC 683864 花费ail质粒EFl-α启动子上游,筛选阳性菌落,构建pWPI-trail/bcl-2-shRNA慢病毒表达载体。 结果： 1.酶切鉴定及测序显示pll-bcl-2-shRNA慢病毒表达载体构建成功。 2.酶切鉴定及测序显示pGM-T-trail构建成功；酶切鉴定显示pWPI-trail慢病毒表达载体构建成功。 3.酶切鉴定显示pWPI-trail/bcl-2-shRNA慢病毒表达载体构建成功。

结果 如下： 1).通过Annexin V和PI双染结果显示长春西汀能诱导MDA-MB-231细胞凋亡。同时，我们检测了30μM长春西汀处理后ZR-75-1细胞和MCF-7细胞，结果同样显示凋亡增加。 2).通过Hoechst33258染色观察细胞凋亡的形态学变化。我们发现Hoechst33258染色后出现了细胞皱缩、核染色质浓获悉更多缩和凋亡小体。 3).JC-1探针测线粒体膜电位显示，长春西汀能使乳腺癌细胞线粒体降低。Western Blot结果显示长春西汀抑制了Bcl-2的表达，并且使线粒体Bax发生转位，诱使线粒体cytochrome c释放至胞浆且促使caspase-3,8,9的活性增加。 3.长春西汀抑制乳腺癌细胞迁移 在更多本实验中，我们用Transwell小室实验(transwell migration assay)观察(15,30,60μM)长春西汀对乳腺癌细胞迁移的影响。结果表明长春西汀能浓度依赖性的抑制乳腺癌细胞迁移。 4.长春西汀对Akt/STAT3/MAPKs信号的影响 为进一步研究长春西汀阻滞细胞周期诱导细胞GDC-0941分子量凋亡和抑制细胞迁移的分子机制，我们通过Western Blot检测了长春西汀对Akt/STAT3/MAPKs信号通路的影响。 我们发现长春西汀能明显抑制p-Akt、p-Stat3的表达，但对p-ERK、p-JNK、p-p38的表达没有影响，这给我们提示长春西汀可能通过抑制抑制p-Akt、p-Stat3的表达来阻滞细胞周期，诱导细胞凋亡和抑制细胞迁移的，但不影响MAPkinases。

随后合成的侧链缩短化合物活性总体得到提高,验证了上述推测,其中化合物27l的活性最好(IC50=43 n M)。2.活性最好的四个化合物(27g,27i,27j,27l)进行了细胞水平的活性评价,PARylation试验结果显示,四个化合物在Hela细胞上抑制活性弱于两个阳性药,其中活性最好的是27i(1.080μM);然而在BRCA-1/2缺陷的HCC1937一般细胞上,4个化合物的抗增殖活性均优于两个阳性药。推测化合物透膜性等因素可能是其中原因之一,目前正在开展进一步验证。本文通过合理药物设计、目标化合物的合成与生物活性评价,发现了活性较好的噻吩并咪唑全新骨架的PARP-1抑制剂,其中四个化合物(27g,27i,27j,27l)单独作用于BRCA1/2细胞系HCC1937和CAPAN-1的活性以及优于阳性药,且对于人正常细胞(人胚胎纤维细胞)的毒性低于阳性药,值得进一步研究。初步的构效关系研究对开展PPAR抑制剂的进一步优化设计具有一定的指导意义。本研究也提示,尽管如今的药物设计方法提供了更加合理和多样化的手段,但药物结构对活性的影响尚难以通过现有的这些药物设计手段进行精确预测,药物设计的挑战尚在,同时其不确定性也是药物研究者的Selleckchem Gefitinib希望和动力所在。
一、研究背景 糖蛋白的异常糖基化在多种恶性肿瘤的发生、发展、转移中起重要作用。糖基转移酶以膜结合的形式存在于细胞高尔基体内,由受到特定蛋白酶刺激的细胞分泌产生。β1,6-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(N-acetylglucosaminyl-transferase-V, GnT-V)是催化N-连接糖蛋白糖链加工合成β1,6分支形成中的重要关键酶,很多报道证明它与肿瘤的分化、侵袭及转移能力高度相关。

(6)运用MTT、结晶紫染色法分别分析转染RNAs之后,对细胞生长及克隆形成的影响；荧光光度法分析转染RNAs之后,对细胞内ATP含量变化的影响；分光光度法分析转染RNAs之后,对细胞葡萄糖摄入量和乳酸生成量的影响。评价miR-128表达水平的变化对肺癌细胞糖代谢的影响。(7) qRT-PCR分析干扰AKT信号通路对miR-128及PFKL表达的影响。(8selleck产品)通过Western blot分析异常表达miR-128之后,对总AKT及磷酸化AKT表达量的影响,分析niR-128调控糖酵解的机制。结果(1)PFKL在肺癌细胞NCI-H460中相对高表达；miR-128在NCI-H1299中相对高表达；miR-128的表达与PFKL的表达呈负相关。(2)生物信息学筛选发现,PFKL是miR-和128的潜在靶点,双荧光素酶报告分析进一步验证了它们之间存在的靶点关系。同时,miR-128表达水平上调能抑制PFKL在mRNA水平及蛋白水平的表达；反之,抑制miR-128的表达,则能促进PFKL在mRNA水平及蛋白水平的表达。共转染miR-128与PFKL的过表达载体,能够补救由miR-128引起的PFKL的表达下降。(3)上selleck合成调miR-128的表达能够抑制肺癌细胞的生长以及克隆的形成；而抑制miR-128的表达,则能促进肺癌细胞的生长以及克隆的形成；干扰PFKL的表达能够抑制肺癌细胞的生长以及克隆的形成,过表达PFKL能够促进肺癌细胞的生长以及克隆的形成。(4)在临床患病样本中,PFKL的表达显著高于正常样本；而miR-128在临床患病样本中的表达则显著低于正常样本；在临床患病样本中,miR-128的表达与PFKL的表达呈负相关。

丙基吗啉侧链的引入既能提高化合物26g的水溶性,又能使化合物的抑酶活性得到保持,所以化合物33a是一个非常有前景的具有良好水溶性和抗肿瘤活性的Abl和Akt1双靶点抑制剂。 结论：本研究基于Abl和Akt1晶体结构及Hit6a与活性位点的结合模式,在实验室前期工作基础上,设计、合成BAY 73-4506溶解度了五个系列共81个基于4-氨基-1-萘酚骨架的Hit6a类似物。通过初步的体外生物活性评价,我们发现了几个具有进一步研究开发价值的化合物,如：化合物26g和33a等,并进一步对其进行了以分子对接为主的构效关系研究,探讨了其与Abl和Akt1靶点的结合模式,查找更多为今后新型小分子Abl和Akt1抑制剂的设计、合成奠定了基础。 直接以内皮细胞为研究靶标,在对血管内皮细胞增殖与抑制的相关分子的深入了解基础上,采用相应的药物阻断其胞内信号传导通路中的关键蛋白Abl和Akt,抑制血管内皮细胞增殖及肿瘤血管生成的手段,已经证U0126明对肿瘤治疗有十分重要的意义。
研究背景膀胱癌是最常见的泌尿系统恶性肿瘤,90%以上为移行细胞癌。膀胱癌的发生发展是一个由多种因素共同作用的复杂过程,复发率较高。膀胱癌目前主要以手术治疗为主,并在术后进行辅助治疗。全球每年新诊断膀胱癌患者达2600 000例,该肿瘤发病率居所有恶性肿瘤第9位,在男性中居第6位,在女性中居第10位。

国内外均有文献报道,应用干扰素α治疗CML-CP患者能让少部分患者获得细胞遗传学及分子生物学缓解,改善长期生存,但是绝大部分患者不能获益或者因不能耐受药物毒副反应而终止治疗。目前,在我国CML患者发病率占总体白血病患者的20%左右,是一种很常见的恶性血液病,发病年龄在中老年人居多,IM时代之前多数患者中位生存期为3-4年,发生急变后预后极差。在一些偏远山区或者低收入家庭中,由Selleckchem Saracatinib于经济条件等因素限制,国内仍有部分患者选择干扰素α作为一线治疗；其中一些患者干扰素α治疗失败或者不耐受后再选择伊马替尼。有关伊马替尼治疗干扰素a失败或者不耐受患者的疗效如何,以及IM治疗新诊断CML组与干扰素失败组CML疗效差异程度,国内均无系统报道。本文回顾性分析和比较了伊马替尼治疗新诊断和干扰素α治疗失败的CML患者的疗效差异情况以及毒副作用,以无期为临床治疗策略的制定提供依据。 目的 1.比较伊马替尼(IM)治疗新诊断组和干扰素治疗失败或者不耐受组的慢性髓性白血病患者的疗效差异,包括6个月时获得部分细胞遗传学缓解率、达到完全细胞遗传学缓解的平均时间、获得完全分子生物学反应率。 2.比较伊马替尼(M)治疗新诊断组和干扰素治疗失败或者不耐受组的慢性髓性白血病患者的原发和继发性细胞遗传学耐药差异。STI571购买 3.比较在CML的早期慢性期(early chronic phase,ECP)、晚期慢性期(late chronic phase,LCP)接受IM治疗的新诊断组和干扰素治疗失败或者不耐受组之间的疗效差异,包括6个月时的部分细胞遗传学缓解率、达到完全细胞遗传学缓解的平均时间、获得完全分子生物学反应率。 4.比较伊马替尼(IM)治疗新诊断组和干扰素治疗失败或者不耐受组的慢性髓性白血病患者的毒副作用差异,包括血液学和非血液学毒副反应。