我们先采用免疫组织化学的方法对临床乳腺癌的标本进行染色,发现乳腺癌组织中表达氯离子通道CLC-3,并且良、恶性组织之间有显著性差异。2.然后我们对ClC-3反义核苷酸链进行设计,并用RT-PCR方法进行鉴定,得到反义的CLC-3核苷酸链。用MTT比色法分别测定不同浓度TAM对MCF-7细胞增殖的抑制率,选取最佳给药浓度(预实验)。然后加入ClC-3反义核苷酸链对TAM10um和20um给药时对细胞增殖的抑制情况进行测定。发现三苯氧胺对MCF-7细胞能够以剂量依赖方式对其增殖有抑制,且ClC-3反义核苷酸链加大了三苯氧胺的对细胞增殖的抑制作用,说明其对三苯氧胺有协同作用。同时我们用脱氧核糖核苷酸末
甲基汞环境污染已成为全球性问题,日益引起人们的密切关注。长期接触低剂量甲基汞所致脑发育损伤机制一直是各国学者研究的热点。随着神经分子生物学和生物新技术的迅猛发展,细胞信号通路在神经发育中的作用倍受关注。本研究旨在探讨PKC-MAPK信号通路及PARP在甲基汞所致脑发育毒性中的作用。首先建立接触低剂量甲基汞PC12细胞模型和模拟人体长期接触低剂量甲基汞所致子代脑发育损伤的小鼠仔鼠动物实验模型,分别采用MTT法和流式细胞术(FCM)检测PC12细胞的存活率和凋亡率;应用免疫组织化学、Western

blot方法检测PC12细胞和实验动物海马PARP、PKCα表达及ERK、JNK磷酸化水平;利用免疫沉淀法测定PC12细胞和实验动物海马中上述各酶的活性;采用跳台避暗实验检测小鼠仔鼠模型学习记忆能力。结果表明,0.010-0.015μM的甲基汞促进PC12细胞PKCα表达和ERK磷酸化(p<0.05),大于0.020μM的甲基汞则使PC12细胞PKCα表达和ERK磷酸化降低,而JNK磷酸化和PARP表达增强(p<0.05)。结论:低剂量甲基汞可影响PC12细胞的分化和存活,诱导PC12细胞凋亡,具有时间和剂量效应关系,并伴有伴有PARP、PKCα表达和ERK、JNK磷酸化双向性改变;接触低剂量甲基汞所致PC12细胞ERK磷酸化的改变可能是通过PKC-MAPK途径实现的;长期接触低剂量甲基汞影响小鼠仔鼠海马神经元PKCα、PARP表达和JNK、ERK磷酸化,降低小鼠仔鼠的学习记忆能力,伴有海马组织超微结构异常改变。本研究可为甲基汞神经发育毒性机制的研究提供重要依据。
目的:建立一种简便可靠的SD大鼠局灶—局灶的脑缺血耐受模型,观察脑缺血预处理(IPC)所诱导的内源性神经保护作用及其时间窗,并从行为学、组织学、脑水肿及神经元凋亡等方面评价其有效性和稳定性。

AG-014699化学结构 这个 方法:分两个阶段进行。 阶段一:探寻诱导局灶性缺血耐受的最佳IPC“剂量”和时间窗。以短暂大脑中动脉缺血(MCAO)作为局灶性IPC,利用改进的二次线栓法先后给予SD大鼠IPC(或假手术)和2h MCAO,IPC时间分别为5min、10min、15min,IPC(或假手术)与2h MCAO的间隔分别为1d、3d、7d、14d、21d和28d,所有大鼠均于第2次再灌注22h后处死。运用Menzies神经功能缺损评定法、TTC染色及HE染色等方法观察各组神经功能缺损、梗死体积和组织病理变化。 阶段二:在阶段一的基础上进一步扩大样本量,对此局灶性IPC模型的有效性和稳定性作出评价。选择10min

MCAO作为IPC,两次缺血的间隔固定为3d,运用Menzies神经功能缺损评定法、TTC染色、干湿重法、HE染色及TUNEL染色等方法观察局灶性IPC对神经功能、脑梗死体积、脑含水量、组织病理变化以及神经元凋亡的影响。
目的 了解E-selectin及其配体sLe A/X在食管癌细胞和血管内皮细胞早期粘附中的作用。方法 用细胞粘附试验检测E-selectin及其配体sLe A和sLe X在食管癌细胞株EC9706与血管内皮细胞株ECV304早期粘附。结果 1、激活内皮细胞组、E-selectin单抗1:200、1:400、1:800组相对粘附率分别为5.2900±0.790、1.8818±0.8289、1.9436±0.3935、3.1730±0.4887,差别具有统计学意义(F值28.789,p值
NSCs的发现和成功分离及体外培养为SCI的治疗带来了新的希望,NSCs在体外展示的生物学特性使我们有理由相信它可以作为优秀的移植治疗SCI的种子细胞。令人失望的是,一些研究发现这些细胞在移植到成年哺乳动物完整和损伤的脊髓后不能产生神经元,而只能分化成胶质细胞,这和利用NSCs的多潜能性来补充替代损伤中丢失的神经元的初衷相去甚远,从而影响了NSCs在SCI研究领域中的应用。但是,也有一些研究表明尽管NSCs移植到正常未损伤脊髓后没有产生神经元的能力,但移植到损伤的脊髓后却能够分化成一定比例的神经元。我们推测移植时机可能对NSCs移植治疗SCI的效果及其分化具有一定的影响。本研究对该问题进行了深入的探讨,试图找到一个适合NSCs移植治疗SCI的时间窗口,并进一步对其可能存在的机制进行探讨。 获悉更多 目的:1.体外分离培养胚胎大鼠脑和脊髓来源的NSCs并对其生物学特性进行深入研究。2.研究NSCs移植治疗SCI的治疗效果。3.寻找适合NSCs移植治疗SCI的时间窗口,以使NSCs移植能对SCI的修复治疗获得最佳的效果。4.

001);PP2A激动剂组不仅单轴突长度明显长于对照组(P<0.001),而且统计学结果显示30%神经元出现了多轴突(P<0.001),同时单轴突神经元减少(P0.05)或极性缺失;D-erythro-Sphingosine处理组神经元没有出现明显的多轴突形成(P>0.05),单轴突长度变化无统计学意义。然后将神经元培养24 h后共转染RFP(or GFP)/pcDNA4.0、RFP(or selleck激酶抑制剂 GFP)/PP2A wild type(wt)和RFP(or GFP)/PP2Adn培养48 h,固定做免疫荧光可见转染pcDNA4.0对照组神经元极性已经建立,大多数神经元有一个轴突和多个树突;PP2Awt组单轴突延长(P<0.01)同时多轴突增多(P<0.001);PP2Adn组多出现短小的突起(P
再灌注是目前急性心肌梗死最有效的治疗措施,但再灌注治疗同时带来再灌注损伤,可加速心肌细胞凋亡及坏死,引起的心肌梗死范围扩大,心律失常,心功能迅速恶化。如果能减少再灌注损伤,则可以改善急性心肌梗死患者的预后。2003年Vinten-Johans实验室[1]提出了后适应概念,即再灌注后立刻给予一次或多次短暂重复心肌缺血与再灌注,能提高心肌对之前发生的较长时间缺血的耐受性,减轻再灌注损伤保护心肌。

糖尿病是冠心病主要危险因素,急性心肌梗死糖尿病人群的死亡率也高于非糖尿病人群。因此研究糖尿病状态下心肌缺血后适应则有更大的意义。但遗憾的是目前关于糖尿病预适应的保护作用机制尚不清晰,而关于糖尿病后适应的心肌保护作用国内尚无报道。 本实验以高脂饮食和STZ诱导建立2型糖尿病大鼠模型,与正常大鼠对照,通过Langendorff离体心脏缺血再灌注模型,研究后适应对于正常大鼠以及2型糖尿病模型的心肌保护作用。研究结果表明后适应对于正常大鼠离体心脏有明显的心肌保护作用并证明PI3K-AKT信号通道在后适应的心肌保护作用机制中起主导作用。相反后适应对于2型糖尿病大鼠离体心脏无心肌保护作用且证明后适应糖尿病心肌保护作用减弱的原因与AKT激活磷酸化不足有关。
目的:在观察人多囊肾组织中β-catenin的分布及其表达差异的基础上;探讨新型PPARγ激动剂DH9对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞(WT9-12)的增殖抑制作用;并比较罗格列酮研究其对细胞中β-catenin表达和激活的影响,以阐明其作用机制。方法:采用免疫组化比较ADPKD病人及ADPKD动物模型PKDV/V小鼠肾组织与相应正常肾组织中的β-catenin的分布和表达的差异,并予不同浓度的DH9及罗格列酮干预WT9-12细胞24、48、72、96小时后,用MTT法测定其细胞增殖抑制率。运用Western

blotting技术分析经DH9单干预或分别与GSK3β抑制剂SB216763、蛋白酶体抑制剂MG132以及PPAR-γ抑制剂GW9662共干预WT9-12细胞后,细胞内β-catenin、磷酸化β-catenin、GSK3β、磷酸化GSK3β、cyclinA、P21 CIP/WAF1、Bax、Bcl-2等蛋白表达的改变,同时以RT-PCR技术分析DH9对WT9-12细胞β-catenin MS-275浓度 mRNA表达的影响。依赖流式细胞术和Annexin V + PI双染色流式细胞术分别观察其对细胞周期和细胞凋亡率的影响。结果:正常肾组织小管上皮细胞β-catenin的分布主要在胞膜处,胞核及胞浆少见;肾囊肿衬里上皮细胞中β-catenin失去正常主要分布在胞膜处的特征,代之以胞浆和核内表达明显增多,表明存在核转位增强。DH9抑制WT9-12细胞增殖作用明显优于罗格列酮(P0.05)。DH9对WT9-12细胞中β-catenin mRNA水平无明显影响,但可下调WT9-12细胞中β-catenin蛋白表达水平,且在加入MG132及SB216763共干预后可逆转DH9对WT9-12中β-catenin的下调作用。DH9可增加P21

CIP/WAF1的蛋白合成,减少cyclin A蛋白的合成,使细胞阻滞在S期。DH9作用72小时后Bcl-2/ Bax的比值较对照组显著下降(P
目的:在离体大鼠心脏缺血-再灌注损伤模型上,研究不同浓度的利多卡因对七氟醚后处理心肌保护作用的影响。 方法:应用Langendorff灌注系统,建立离体大鼠全心心肌缺血40min再灌注60min损伤模型,测定心室力学指标和复灌各时点冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。实验结束测定心肌梗死面积。将48个心脏随机分为6组(n=8):缺血(ISCH)组,七氟醚后处理(SPC)组,七氟醚后处理+浓度分别为2、10和20μg/ml的利多卡因处理(SPC+Lid-2,SPC+Lid-10和SPC+Lid-20)组,以及10μg/ml利多卡因处理(Lid-10)组。 结果:与ISCH组相比,七氟醚后处理使心肌梗死面积从47.3±5.6%减少到18.6±3.1%(p＜0.05),降低了复灌期流出液中LDH的含量,明显改善心室力学指标,增加了冠脉流量。20μg/ml的利多卡因取消了七氟醚后处理的心肌保护作用。 GSK1120212细胞系 结论:超治疗剂量的利多卡因可以阻断七氟醚后处理的心肌保护。
目的:肝脏的缺血再灌注常见于诸多临床事件中,如肝切除术、肝移植术等。本文应用GSK-3的抑制剂氯化锂来保护肝脏在缺血再灌注时肝细胞的凋亡,并探索其中机制。 方法:应用体外缺复氧模型模拟肝脏缺血再灌注的环境。将小鼠正常肝细胞AML-12细胞分为正常氧含量组、缺复氧组、及不同浓度的氯化锂预处理2小时后缺复氧组后造8小时缺复氧模型,用MTT法检测细胞活性,Annexin V法检测细胞的凋亡;DCFDA探针检测细胞内的活性氧的变化;JC-1探针检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测细胞中GSK-3、JNK的磷酸化程度、线粒体内外的细胞色素C含量变化和活化后的caspase-3的含量变化。 结果:与缺单纯复氧组比较,用10mM氯化锂预处理组能够明显减少由缺复氧导致的AML-12细胞的凋亡(P
目的 探讨线粒体ATP敏感钾通道(mitoKATP)和线粒体膜电位(Δψm)在支气管哮喘气道平滑肌细胞中对PKCα信号转导途径和细胞增殖的影响。 方法 以SD大鼠为实验动物,随机将36只雄性大鼠平均分为正常组和哮喘组,以腹腔注射和雾化吸入卵白蛋白法制备大鼠哮喘模型。取大鼠气道平滑肌细胞,分为六组进行干预:A.正常对照组;B.正常+diazoxide(mitoKATP特异性开放剂)组;C.

05)。但是与LPS组相比,LPS+小檗碱组ERK活性水平差异有统计学意义(P
目的:探讨p38MAPK蛋白在体外培养神经元中的激活及钙调蛋白抑制剂W-7的干预作用。方法:神经元原代培养并采用NSE免疫细胞化学技术鉴定神经元。取原代培养7d的大鼠皮质神经元随机分为5组:正常对照组,仅用DMEM/F12完全培养基;NMDA组,去除正常神经元培养液,加入NMDA50μmol.L-1,处理时间10min;W-7干预组,W-7浓度分别为25、50和100μmol.L-1,继续培养24h,加入NMDA

50μmol.L-1。免疫细胞化学染色法及免疫印记法检测皮质神经元内p38MAPK蛋白的表达水平。结果:培养6～12h后大部分神经元贴壁,随时间延长形态多变,突起逐渐增多,神经元突起间互相接触形成网络。NSE鉴定神经元纯度为90.86%;免疫细胞化学染色法检测,NMDA组p38MAPK蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),W-7组低于NMDA组(P<0.05或P<0.05),W-7干预组p38MAPK表达水平低于NMDA组(P<0.01),呈剂量依赖性。结论:NMDA导致皮质神经元p38MAPK蛋白表达增高,W-7可降低p38MAPK的蛋白表达。
PC12细胞被广泛用于神经细胞功能、分化、凋亡和神经递质分泌,以及潜在的分子机制的研究。氧化应激可导致PC12细胞凋亡,其作用方式为激活对氧化还原反应敏感的细胞信号传导,主要与丝裂原活化蛋白激酶、线粒体凋亡及NF-κB信号传导途径有关。本文综述了氧化应激致PC12细胞凋亡的信号传导途径,旨在为神经系统氧化应激相关疾病的抗氧化剂药物治疗和凋亡信号途径药物干预治疗提供理论依据。
肠缺血再灌注(intestinal Gefitinib ischemia reperfusion,IIR)损伤是常见的组织器官损伤之一,它在严重感染、外伤、休克、心肺功能不全、器官移植等的过程中起重要作用。其机制主要为缺血一段时间后,组织适应了低氧环境的新陈代谢,血流的回复导致激活血管内巨噬细胞,继而相应的生成活性氧自由基(ROS),ROS又诱发内皮损伤,以及原炎性因子
前B细胞克隆增强因子(PBEF)是具有促进早期B细胞分化的一类生长因子,其基因于1994年首次自人外周血淋巴细胞cDNA基因文库中克隆获得。2005年在内脏脂肪细胞中发现一种与PBEF基因序列相同的cDNA基因序列,将其命名为Visfatin即内脏脂肪素或内脂素,此后研究发现其具有烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)活性,因此又将其命名为Nampt。现将近年来PBEF基因的分子生物学特征及其
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内主要的信号转导系统之一。p38MAPK是MAPK家族中的重要成员,其介导的信号转导通路在炎性反应中具有重要作用。p38MAPK与急性坏死性胰腺炎关系密切,不仅参与了急性坏死性胰腺炎胰腺的局部损伤,还参与了胰外并发症的发生。本文对p38MAPK信号通路在炎症中的作用及其在急性坏死性胰腺炎中的研究进展予以综述,旨在为急性坏死性胰腺炎的治疗提供新的思路。
缺血再灌注损伤(Ischemia-Reperfusion

LBH589制造商 Injury,IRI)是指在缺血基础上恢复血流后,不仅未减轻原有组织的缺血性损伤,反而使其功能障碍或结构损伤进一步加重的现象。肠道是对缺血反应最敏感的组织之一,严重创伤、失血等原因均可引起肠缺血再灌注损伤(Intestinal Selleck BMS-907351 Is-chemia-Reperfusion Injury,IIRI)。研究发现
近年来的研究发现,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是细胞将信号从细胞膜传递到细胞核的主要通路。其中p38MAPK可通过调节转化生长因子β1、核因子-κB及血管内皮生长因子等炎症因子的表达影响糖尿病肾病的进程。研究p38MAPK及其信号转导通路机制可能为糖尿病肾病的治疗提供新的理论基础,也可为临床提供新的更为有效的诊治手段。
目的探讨吡格列酮(PIO)对血管内皮细胞的保护作用及其可能机制。方法用四唑盐比色法(MTT法)检测PIO对高糖损伤血管内皮细胞的最佳保护浓度;按不同干预条件,将血管内皮细胞分为7组:正常培养组[A组,葡萄糖(Glu)5.5 mmol/L],高糖培养组(B组,Glu 37.5 mmol/L),C、D、E组分别为不同浓度PIO+高糖培养,F、G组为不同浓度SP600125+PIO+高糖培养。Western blot法检测各组c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达。结果 PIO在1×10-8~1×10-4mmol/L时对高糖损伤的血管内皮细胞有保护作用;与B组相比,C~E组p-JNK表达降低,差异有统计学意义(P<0.

1μg/ml时细胞迁移几乎没有变化，10μg/ml时细胞的迁移受到抑制，而在LPS浓度为1μg/ml时细胞的迁移能力增强。分别阻断了NF-κB和P38、JNK和ERK信号途径后，细胞的迁移能力与单纯LPS1μg/ml作用时相比有不同程度的抑制。定量PCR的结果显示1μg/ml

LPS能够上调DPSCs中SDF-1、CXCR4、MCP-1、FGF2、MIP-1、TGF-β1和IL-8等趋化因子的表达，分别阻断了NF-κB、P38、JNK和ERK通路后，LPS促进趋化因子的表达的作用被抑制了。结果提示LPS可能通过NF-κB、P38、JNK和ERK信号途径调控DPSCs的迁移。 什么 2、 LPS对DPSCs的黏附的影响 细胞黏附实验检测不同浓度的LPS对DPSCs黏附的影响。结果显示LPS的浓度为0.1μg/ml时，DPSCs的黏附与对照组相比没有显著的变化，而当LPS浓度为1μg/ml和10μg/ml时，DPSCs的黏附能力均显示为增强；而在分别阻断了NF-κB和P38、JNK和ERK信号途径后，LPS介导的DPSCs的黏附能力的增强被抑制了。定量PCR结果显示1μg/ml LPS能促进ICAM-1、VEGF、FN和Integrinβ1等黏附分子的表达，而分别将NF-κB、P38、JNK和ERK通路阻断后，DPSCs中这些黏附分子的表达被抑制了。提示我们LPS可以促进DPSCs黏附，而LPS对DPSCs黏附能力的调控很有可能是通过NF-κB、P38、JNK和ERK信号途径实现的。

3、LPS对DPSCs的成脂分化的影响 用成脂诱导液对DPSCs诱导培养21d后进行油红O染色和定量分析，探讨不同浓度的LPS对DPSC成脂分化的影响。结果显示在LPS浓度为0.1μg/ml时对细胞的成脂能力几乎没有影响，而当LPS浓度为1μg/ml和5μg/ml时，DPSCs的成脂能力均显示为抑制；分别阻断了NF-κB、JNK和ERK信号途径后，LPS刺激DPSCs形成脂滴的数量相较LPS组均表现为上调，而阻断P38途径后，DPSCs形成的脂滴量则减少。定量PCR的结果显示1μg/ml 这个 LPS能够抑制成脂相关基因PPARγ、C/EBP-、C/EBP-β、C/EBP-的表达；与LPS组相比，NF-κB、JNK和ERK信号被阻断后，PPARγ、C/EBP-、C/EBP-β、C/EBP-的表达量显著上调；但是P38通路被阻断后，C/EBP-β、C/EBP-的表达量没有明显差异，PPARγ、C/EBP-的表达被抑制。结果提示LPS抑制牙髓干细胞脂向分化， NF-κB、JNK和ERK通路可能介导LPS的的作用。 综上所述，本实验结果表明一定浓度的LPS能够增强DPSCs的黏附，促进DPSCs的迁移，抑制DPSCs定向分化为脂肪细胞，在此过程中， NF-κB和MAPK信号途径可能发挥重要的作用。
第一部分P38MAPK信号通路在BMP-13诱导C3H10T1/2细胞成心肌样细胞分化过程中的作用 目的：研究P38MAPK信号通路在BMP-13诱导C3H10T1/2细胞成心肌样细胞分化过程中的作用。

方法：通过293细胞的扩增得到高滴度Ad-BMP-13、Ad-GFP。分别向C3H10T1/2细胞转染Ad-BMP-13和Ad-GFP24h后，倒置荧光显微镜下观察绿色荧光的表达，流式细胞术检测转染效率。实验分组如下：①Ad-BMP-13转染组②Ad-GFP转染组③C3H10空白组。通过Ad-BMP-13转染C3H10T1/2细胞24h，Western selleck化学 Blot检测p-P38MAPK和t-P38MAPK的表达；免疫荧光技术定位p-P38MAPK。 结果： 1.通过293细胞的扩增后得到高滴度Ad-BMP-13、Ad-GFP。 2. Ad-BMP-13、Ad-GFP转染C3H10T1/2细胞24h后流式细胞术检测转染效率分别为41%和45.12%。 3. BMP-13诱导组的p-p38MAPK表达量较空载腺病毒GFP组和C3H10空白组明显升高（P<0.05）。si-NC+BMP-13组GATA-4、MEF-2C水平显著高于Ad-si-NC组和空白组（P<0.05）；si-p38+BMP-13组的GATA-4、MEF-2C水平显著低于si-NC+BMP-13组（P
背景和目的： 糖尿病是一种慢性、低度炎症性疾病。COX-2作为重要的炎症介质,通过与炎症因子相互作用,对组织产生作用,促进糖尿病和糖尿病并发症的发生和发展。COX-2基因启动子区-765G/C位点的多态性和COX-2启动子活性相关,从而影响COX-2表达水平。COX-2启动子区-765G/C基因多态性可能与糖尿病肾病相关。本研究以浙江省汉族2型糖尿病人群为研究对象,旨在探讨-765G/C基因多态性与2型糖尿病肾病的相关性。 方法： 在中国浙江杭州某社区汉族人群中选取171名健康志愿者与221名2型糖尿病(T2DM)患者。根据尿白蛋白/肌酐值比值(ACR)将T2DM组分为三组：A.糖尿病正常蛋白尿组：ACR0.05),提示样本具有群体代表性。 2.正常对照组和2型糖尿病组的基因型分布GG、GC、CC分别为86.55%、13.45%、0%和92.76%、7.24%、0%,两组等位基因G、C频率分别为93.27%、6.73%和96.38%、3.62%。对照组和T2DM基因型分布差异有统计学意义(P<0.

5%,猪油10%,蛋黄粉10%,维持料59.5%,蔗糖20%)喂养,高胆固醇+阿伐他汀组在给予小鼠高胆固醇饲料喂养的同时,并用阿伐他汀5

PD98059 mg/(kg.d)灌胃,12周后获取血和肝脏。分析血清胆固醇和低密度脂蛋白的变化;肝脏组织切片用于HE染色以观察肝脏组织学病变;应用免疫组化PV法检测肝脏组织中OPN的表达;从冰冻肝脏组织中提取蛋白,用Western blot方法检测OPN变化。我们首先用不同浓度(0、5%、10%)兔高胆固醇血清刺激人肝癌细胞(HepG2)24h,分析OPN表达和ERK、p38磷酸化水平变化情况,再选取明显诱导HepG2细胞OPN表达变化的高胆固醇血清浓度,同时用不同浓度的阿伐他汀刺激HepG2细胞24h,分析OPN表达和ERK、p38磷酸化水平变化。结果:ApoE基因敲除小鼠高胆固醇血症模型复制成功,ApoE基因敲除小鼠在高胆固醇饮食12周后,与正常对照相比血清中胆固醇和低密度脂蛋白含量显著增加(P<0.05,P<0.05);高胆固醇饮食12周加喂阿伐他汀,与高胆固醇饮食组相比血清中胆固醇和低密度脂蛋白含量显著降低(P<0.05,P
【背景】肿瘤的多药耐药(multidrug resistance,MDR)现象是导致化疗失败的主要因素,也是影响患者生存的主要因素。据统计[1、2],有90%以上的肿瘤患者其化疗失败的原因不同程度地与MDR有关。而TGF-beta/Smads信号传导通路在调节肿瘤多药耐药起到非常重要的双向调节作用:肿瘤发生早期,TGF-beta通过其广泛的多细胞抑制达到肿瘤抑制因子的作用;肿瘤形成后期,则促进肿瘤细胞增殖的。 AG-014699分子重量 P15,即细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B,又称Cdkn2b、INK4B,属INK4蛋白家族,又称多肿瘤抑制基因(MTS1)。P15系TGF-beta/smads信号传导系统下游区的十分重要的细胞生长周期的抑制因子,其表达受到TGF

beta的诱导,在TGF beta信号转导通路中主要介导G1期阻滞的作用[3、6]。通过Smad介导的转录和myc所致的生长阻滞的解除,TGF-β可以快速诱导P15在许多不同类型的细胞中的表达[7]。同时TGF-β抑制cdk2激酶活性,提高p15蛋白的表达水平[8]。 所以,本课题拟通过调节HepG2/CDDP耐药细胞株中p15蛋白的表达,进而探讨p15与HepG2/CDDP耐药细胞株多药耐药的相关性及其可能的调控作用机制。 【目的】⑴检测P15在HepG2/CDDP动态的耐药模型中的表达情况。⑵P15对HepG2耐药细胞的表型的作用;⑶探讨p15介导HepG2/CDDP细胞株多药耐药性变化的可能机制。 【方法】⑴采用低浓度逐步递增法,建立HepG2/CDDP动态的耐药模型[9、10、11];⑵将P15编码区片段插入pcDNA3.1以及构建P15正义表达载体,将HepG2耐药细胞分成3组,分别用P15正义表达载体、pcDNA3.1空载体利用脂质体转染到其中2组,另一组为阴性对照组,Western blot验证转染;⑶RT-PCR和Western blot检测P15的表达;⑷流式细胞仪检测HepG2/CDDP耐药细胞株内阿霉素的蓄积和潴留,并以此计算药物的泵出率;⑸流式细胞仪对转染细胞及其对照细胞进行细胞周期分析,并计算细胞的增殖指数(PI);⑹Western

JQ1分子重量 blot检测细胞膜药物转运相关蛋白MRP、P-gp蛋白的表达;⑺Western blot检测及细胞凋亡分子BCL-2、Bax的表达。 【结果】 ⑴成功用顺铂诱导HepG2耐药,并建立HepG2/CDDP耐药模型,耐药指数为6.75μg/ml; ⑵RT-PCR和Western blot检测P15在2.0μg/ml的CDDP诱导培养HepG2/CDDP耐药细胞24h、48h、3d、5d、7d后,随着HepG2/CDDP耐药细胞株耐药表型的增强,P15表达水平逐渐下降; ⑶成功构建p15正义表达载体;稳定转染细胞后建立P15表达升高的细胞系HepG2/CDDP-pcDNA3.1-p15,空载体对照细胞系HepG2/CDDP-pcDNA3.1及亲本细胞HepG2/CDDP,RT-PCR和Western blot验证转染成功,p15正义表达载体可上调P15的表达; ⑷HepG2/CDDP-pcDNA3.1-p15细胞内阿霉素的蓄积和潴留增高; ⑸HepG2/CDDP-pcDNA3.1-p15细胞增殖指数降低,细胞增殖能力减弱; ⑹HepG2/CDDP-pcDNA3.1-p15细胞的MRP、P-gp蛋白的表达下降; ⑺HepG2/CDDP-pcDNA3.1-p15细胞的Bcl-2表达下降,Bax表达上升。 【结论】 1. HepG2/CDDP动态耐药细胞模型建立成功; 2. P15随着HepG2/CDDP耐药细胞株耐药表型的增强,其表达水平逐渐下降; 3.

01,P<0.05),表明RIP2表达质粒成功转染SW480细胞；大肠杆菌感染SW480细胞后,随着时间的推移,胞内的大肠杆菌数量也随之增长,说明大肠杆菌在SW480细胞内的生长呈增加趋势；将大肠杆菌刺激细胞24h后,转染RIP2细胞组的活菌数较转染空质粒组和未转染质粒组胞内活菌数数量明显减少,其差异有统计学意义(P<0.01),蛋白表达水平较对照组增高(P
目的:丝裂原活化蛋白激酶家族(Mitogen-activated protein kinase, MAPKs)是细胞内广泛存在的一类含丝氨酸/苏氨酸残基的蛋白激酶,介导细胞生长、发育、分裂、凋亡等多种生理过程。p38

MAPK是MAPKs家族的一个亚型,大量研究发现,p38 MAPK信号传导通路与脑缺血损伤及脑缺血耐受诱导有着密切联系。我们既往的研究结果表明,在体脑缺血预处理通过引起星形胶质细胞谷氨酸转运体-1 ( glial glutamate transporter-1, GLT-1)大量表达而诱导脑缺血耐受,但脑缺血预处理引起GLT-1大量表达的机制目前尚不清楚。脑缺血预处理是否通过p38 MAPK信号转导通路诱导GLT-1大量表达而发挥脑保护作用目前尚未见相关报道。因此,本实验旨在观察脑缺血耐受诱导过程中,p38 MAPK激酶对大鼠海马CA1区谷氨酸转运体GLT-1蛋白表达的影响,探讨脑缺血预处理是否通过p38 MAPK通路诱导GLT-1蛋白大量表达而发挥保护作用,从而为将来脑缺血性疾病的防治提供理论依据。 没有 方法:健康雄性Wistar大鼠(280～320g)300只,随机分为以下三部分: 1脑缺血预处理对p-p38 MAPK蛋白及GLT-1蛋白表达的影响 除control组之外,其余大鼠均首先永久凝闭椎动脉,恢复2天后,进行假手术或脑缺血处理,具体分组如下:①control组(n=5);②sham组(n=45):只暴露双侧颈总动脉,不阻断血流;③脑缺血预处理(cerebral ischemic preconditioning, CIP)组(n=45):夹闭双侧颈总动脉3 min,然后恢复血流再灌注;④损伤性缺血(ischemic insult, II)组(n=45):夹闭双侧颈总动脉8 min,然后恢复血流再灌注;⑤CIP+II组(n=45):夹闭双侧颈总动脉3 min作为脑缺血预处理,再灌2天后,再次夹闭双侧颈总动脉8 min作为损伤性缺血,然后恢复再灌注。除control组之外的其余各组,又分为9个时间点,即假手术或末次缺血后0

min、15 min、30 min、3 h、6 h、1 d、2 CFTR activator d、4 d、7 d(每个时间点n=5)。 在规定的时间点,断头取海马脑组织,硫堇染色进行神经病理学评价;应用Western blot法观察p-p38 MAPK蛋白及GLT-1蛋白的表达。2 p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580对脑缺血耐受诱导的影响 具体分组如下:①sham组(n=5);②CIP组(n=5);③II组(n=5);④CIP+II组(n=5);⑤SB203580+sham组(n=15):暴露颈动脉前30分钟右侧脑室注射p38 MAPK特异性抑制剂SB203580,其余步骤同sham组;⑥3% DMSO+CIP+II组(n=5);暴露颈动脉前30分钟右侧脑室注射3%DMSO

20μl,其余步骤同CIP+II组;⑦SB203580+CIP+II组(n=15):脑缺血预处理前30分钟右侧脑室注射SB203580,其余步骤同CIP+II组。其中,⑤、⑥、⑦组根据SB203580剂量不同,又分成1.25 nmol、2.5 nmol、5n mol 3个亚组,每个亚组n=5。 末次缺血或假手术后7天取材,应用硫堇染色观察海马CA1区病理学分级和神经元密度,探讨p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580对脑缺血耐受诱导的影响。 3 p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580对脑缺血耐受诱导过程中GLT-1蛋白表达的影响 具体分组如下:①3% DMSO+CIP+II组(n=30);②SB203580+CIP+II(n=60)。根据设计,脑缺血预处理前30分钟侧脑室注射3% DMSO或SB203580,然后夹闭双侧颈总动脉3 min作为脑缺血预处理,再灌2天后,再次夹闭双侧颈总动脉8 或者 min作为损伤性缺血,而后恢复再灌注。根据SB203580剂量不同,又分成2.5 nmol、5 nmol两个亚组,每个亚组n=30。 于末次缺血后即刻(0 min)、3 h、6 h、1 d、4 d、7 d时取海马脑组织(每个时间点n=5),应用western blot法观察GLT-1蛋白的表达,探讨抑制p38 MAPK信号转导通路对GLT-1蛋白表达的影响。 结果: 1在脑缺血耐受诱导过程中,大鼠海马CA1区p-p38 MAPK蛋白和GLT-1蛋白的表达及其时间对比 Western blot分析显示,control组大鼠海马CA1区有一定量的GLT-1蛋白的基础表达。但control组大鼠海马CA1区p-p38MAPK蛋白的基础表达极低。 与control组相比,sham组GLT-1的表达在各时间点均有所上调,IOD比值在各时间点均明显升高(P0.05),从3 h时间点开始降低,随着时间的推移逐渐降低,以4 d、7 d时间点最明显(P0.05)。第二次高峰从缺血后6 h开始逐步升高,到4 d时达到其峰值,7 d时依然很高(P0.05)。p-p38MAPK的western blot分析显示,p-p38MAPK在早期即0 min、15 min、30 min、3 h时间点表达非常明显(P0.05)。 II组大鼠在2天内未见CA1区明显的锥体神经元损伤;7 d时,细胞形态发生明显改变,几乎全部神经元死亡或缺失,ND值为17±8.06,与sham组相比,HG明显升高(P<0.01),ND明显降低(P<0.01),ND值为180±11.67、明显升高(P0.05)。 3% DMSO+CIP+II组的大鼠海马CA1区锥体神经元排列整齐,形态完整,未见损伤。与CIP+II组相比,HG、ND(189±11.03)均无显著差别(P>0.

检测弥慢性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)户Y_盒结合蛋白1(YB-1)的表达情况,探讨其与肿瘤细胞耐药、化疗疗效及预后的关系。2.体外诱导Daudi细胞多药耐药的形成,检测YB-1基因沉默前后Daudi细胞中mdr1基因诱导性表达和细胞耐药特征形成的差异,探讨YB-1蛋白在诱导性多药耐药形成中的作用。3.探讨阿霉素诱导Daudi细胞耐药过程中,YB-1核易位与核蛋白同mdr1启动子Y-box序列结合活力、mdr1基因启动子转录活性以及MAPK/ERK信号通路活化的关系。

方法：1.采用Envision两步法检测DLBCL和反应性淋巴结增生(RLH)石蜡标本中YB-1、磷酸化ERK(pERK)和P-gp的表达,分析YB-1的核定位与细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)、pERK的相关性,并探讨其与临床参数的关系。2.构建针对人YB-1的特异性shRNA真核表达载体：把被9 bp序列间隔的针对YB-1不同靶序列的三个19 bp的反向重复序列及随机片段,插入携带人U6SnRNA启动子的pGensil-1质粒载体中,分别用PstⅠ和SalI酶切鉴定,并将酶切鉴定正确的重组质粒作测序分析。3.采用脂质体介导的方法将三种人YB-1基因特异性shRNA及随机片段的真核表达载体(YBX1、YBX2、YBX3、pGenesil-1/con)转染进Daudi细胞中,G418抗性筛选两周后获得阳性克隆。取YB-1基因干扰效果最好的细胞株进行后续实验,以转染随机片段的细胞株(Daudi/c)为对照组。4.阿霉素间歇性长期作用于Daudi细胞,诱导细胞耐药,RT-PCR方法检测YB-1、mdr1基因表达情况,FCM检测各组细胞mdr1基因编码的P-gp的表达水平,Western blotting法检测诱导过程中YB-1蛋白表达及其核易位的变化情况,四唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞的生长抑制率(IR)与IC50值,细胞内罗丹明123(Rho123)潴留实验检测P-gp的功能状态。5.采用凝胶迁移滞后实验(EMSA)方法检测各实验组核蛋白与mdr1启动子Y-box序列的结合活性。6.采用染色质免疫沉淀(chromatin

以及 immunoprecipitation, ChIP)实验来进一‘步证实YB-1与mdrl启动子Y-box序列在细胞内特异性结合。7.合成mdrl基因启动子片段以及YB-1结合位点突变序列,克降到荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中,构建pMDR-luc和突变pMDR-Ym-luc重组载体；川脂质体将重组的报告基因载体与内参质粒p-半乳糖苷酶(β-gal)瞬时共同转染Daudi细胞,荧光素酶活性分析mdr1基因启动子活性的改变。8.运用MAPK抑制剂PD98059预处理Daudi细胞1小时后,再加入阿霉素诱导耐药(诱导方法同上),Western 一般 blotting法检测ERK蛋白及其磷酸化情况、YB-1蛋白表达及其核易位的变化。RT-PCR检测mdr-1, YB-1基因表达,FCM检测P-gp的表达情况。 结果：1.DLBCL组与RLH组的YB-1胞浆阳性表达率差异无显著性(P=0.763),而DLBCL组的YB-1胞核阳性表达率明显高于RLH组(P＜0.05); DLBCL临床Ⅲ-Ⅳ期、结外淋巴组织侵犯及骨髓浸润患者的YB-1胞核阻性表达率和pERK表达强度明显高于Ⅰ～Ⅱ期、结内病变及无骨髓浸润患者,差异有显著性(P<0.005)均呈正相关；化疗有效组的YB-1核阳性和pERK表达强度表达率明显低于化疗无效组(P<0.038)；化疗有效组的P-gp表达强度显著低于化疗无效组(P
血管生成在胚胎发育、机体稳态的维持、创伤修复、以及女性生理周期等生理过程中发挥着重要的作用。而且血管生成异常与多种疾病相关,包括缺血性疾病、慢性炎症以及恶性肿瘤等。促血管生成能力是非肿瘤组织细胞发生恶性转化所必须的,是重要的肿瘤恶性标志之一。对肿瘤血管生成的不断深入研究,为临床肿瘤治疗带来了许多新途径。肿瘤血管生成机制复杂多样,是目前肿瘤研究的热点问题之

Gadd45a是一种DNA损伤诱导基因,可被多种应激损伤诱导表达,包括紫外线照射、电离辐射、血清饥饿、化疗药物作用等。Gadd45a可诱导细胞周期阻滞、细胞凋亡、DNA损伤修复等。此外研究发现,Gadd45a具有多种抑瘤活性,参与维持基因组稳定性,降低MMPs转录表达,维持细胞接触性抑制和同型细胞间粘附,从而抑制细胞侵袭转移。 本研究通过体内体外实验证实Gadd45a可抑制肿瘤血管生成。Gadd45a失活可促进移植瘤内血管密度升高,增强鸡胚尿囊膜血管生成反应,以及在体外可显著增强内皮细胞迁移和成管能力。为了进一步研究Gadd45a调控血管生成的机制,我们对Gadd45a敲除和野生型的MEFs细胞进行了表达谱芯片分析,发现有五种促血管生成因子在Gadd45a敲除的MEF细胞中表达升高。其中VEGF-A是最重要的促血管生成因子,MMP3属基质金属蛋白酶,参与细胞外基质重塑。RealTime ERK inhibitor PCR和western blot证实VEGF-A和MMP3的变化与芯片结果相符。同时,我们发现在HeLa细胞中,敲降Gadd45a也可诱导VEGF-A和MMP3表达升高。进一步的研究发现,Gadd45a调控肿瘤血管生成与STAT3(?)目关。Gadd45a可抑制STAT3 Ser727的磷酸化。STAT3是一种重要的转录因子,其活性受到两个磷酸化位点的调节,包括Tyr705和Ser727位点。同时,VEGF-A和MMP3是STAT3调控的下游蛋白。上述结果提不,Gadd45a可通过抑制STAT3 Ser727的磷酸化,下调VEGF-A和MMP3表达。STAT3 Ser727的磷酸化可受到多种激酶调控,其中包括p38和mTOR。本研究发现mTOR特异性抑制剂Rapamycin可显著抑制这两株MEFs细胞STAT3 Ser727位点磷酸化。Pulldown实验证实GST-Gadd45a可结合mTOR,而不结合STAT3.

Snapshot data were compared to Sanger sequencing data. Of the 110 samples, 51(46.4%) harbored at least one mutation. The mutation frequency in adenocarcinoma specimens was 55.6%, and the frequencies of EGFR, KRAS, PIK3 CA, PTEN, and MEK1 mutations were 35.5%, 9.1%, 3.6%,

0.9%, and 0.9%, respectively. No mutation was found in the HER2, NRAS, or BRAF genes. Three of the 51 mutant samples harbored double mutations: two PIK3 CA mutations coexisted with KRAS or EGFR mutations, and another KRAS mutation coexisted with a PTEN mutation. Among the 110 samples, 47 were surgical specimens, 60 were biopsy specimens, and 3 were cytological specimens; the corresponding mutation frequencies were 51.1%, 41.7%, and 66.7%, respectively(P = 0.532). Compared to Sanger sequencing, Snapshot specificity

was 98.4% and sensitivity was 100%(positive predictive ABT263 value, 97.9%; negative predictive value, 100%). The Snapshot assay is a sensitive and easily customized assay for multigene mutation testing in clinical practice.
肺癌是病死率最高的恶性肿瘤,许多肺癌患者发现时已是晚期,丧失了手术机会,以化疗为主的内科治疗在肺癌的治疗中扮演着重要角色。近年来,以表皮生长因子受体等为靶点的靶向药物研制取得重大进展,有些药物已经应用于临床并取得了满意的效果。许多潜在靶点和药物也在世界范围内研究和开发中。现综述肺癌靶向治疗的研究进展。
目的:回顾性分析肺炎性肌纤维母细胞瘤的临床病理特点、诊治现状及预后。方法:选取2009-01-01-2012-12-31河北医科大学第四医院7例因患肺炎性肌纤维母细胞瘤而入院治疗患者,对其临床症状、影像学表现、病理特征及随访资料进行分析。结果:共7例肺炎性肌纤维母细胞瘤患者,占同期胸外科手术的0.078%(7/8 有 968)。男3例,女4例。年龄23~71岁,平均年龄48.1岁。有呼吸道症状者3例,其余患者均为体检发现,病变位于左上叶者4例,左下叶者2例,右下叶者1例。病灶呈周围型3例,中心型3例,浸润生长1例;术前诊断考虑为癌或癌可能性大的5例,考虑为良性病变者1例,术前明确诊断为肺炎性肌纤维母细胞瘤者1例;本组7例均行手术治疗,其中肺楔形切除2例,肺段切除1例,肺叶切除4例,术后病理诊断均未发现肺门淋巴结转移。所有7例均在定期随访中,1例术后9个月发现纵膈、对侧肺及心包的转移,于术后17个月死亡,其余患者未发现复发或转移。结论:肺炎性肌纤维母细胞瘤是肺部少见的肿瘤,具有一定的异质性,术前明确诊断困难,手术完全切除是首选治疗,多数患者预后良好。
肺癌是中国发病率及死亡率最高的恶性肿瘤。肿瘤细胞在驱动基因的作用下持续生长,并对该驱动基因的抑制剂具有高敏感性。近年来,针对驱动基因的检测技术不断发展,相应的驱动基因靶向药物也层出不穷。本文主要从中国肺癌的驱动基因、驱动基因的检测及针对驱动基因的靶向治疗3个方面进行综述,并展望中国肺癌驱动基因的应用前景。
对非小细胞肺癌分子病理学的深入理解,有助于开展个性化临床治疗和预后。基因检测可以指导非小细胞肺癌靶向药物治疗,提升药物疗效,延长患者生存期。本文简要介绍了与非小细胞肺癌相关的EGFR基因和EML4-ALK融合基因检测方法的研究进展。
蛋白酪氨酸激酶是一类具有酪氨酸激酶活性的蛋白质,其异常表达与肿瘤的侵袭、转移以及肿瘤新生血管的生成等密切相关。以蛋白酪氨酸激酶作为靶点的药物研究已取得了突破性进展,目前已有二十余个小分子蛋白酪氨酸激酶抑制剂用于临床肿瘤的治疗,并有大量的抑制剂处于临床前和临床研究阶段。对近年来小分子蛋白酪氨酸激酶抑制剂的研究进展进行了综述。
医学科技日新月异,20世纪70年代随着单克隆抗体技术的发展,在病理学上开展了免疫组织化学(IHC),其把人们从传统病理组织学(形态学)推向蛋白质水平(抗原、抗体的定性和定位),在现代病理诊断中的应用日益广泛,尤其在肿瘤诊断与鉴别中起着非常重要的作用,对于诊断肿瘤、肿瘤分类、判断预后产生了巨大的影响,扩展了对各种疾病及肿瘤形成过程的认识,提高了病理诊断与研究水平。近来肿瘤的分子病理诊断及靶向治疗的意义成为研究热点。
Gastric

MS275 cancer represents a serious health problem on a global scale. It is the second leading cause of cancer-related death worldwide. Novel therapeutic targets are desperately needed because the meager improvement in the cure rate of about 10% realized by adjunctive treatments to surgery is unacceptable as > 50% patients with localized gastric cancer succumb to their disease.

cyclinD1、P27和GSK-3β (glycogen synthase kinase-3p)蛋白在增殖期子宫内膜、良性增生性子宫内膜、EIN、子宫内膜样腺癌中的表达水平及其相关性分析,探讨这些PI3K/Akt通路的下游分子在子宫内膜癌前病变发生发展过程中的作用机制。

方法： 复查2009年至2011年天津医科大学总医院病理科刮宫标本常规HE切片,筛选出增殖期子宫内膜(proliferative endometrium, PE)10例；子宫内膜单纯性增生(simple hyperlasia endometrium)15例,子宫内膜复杂性增生(complex hyperlasia endometrium)15例,单纯性增生与复杂性增生合为一组即良性增生性子宫内膜(benign Nintedanib hyperlasia endometrium, BE)30例；根据新标准复查切片,找出EIN38例并选取30例；子宫内膜样腺癌(EA)20例。运用免疫组织化学的方法SP法分别检测各实验组中PI3K、cyclinD1、P27、GSK-3p蛋白的表达水平,采用SPSS16.0软件包分析实验数据(Kruskal-WallisH检验、Mann-WhitneyU检验、Wilcoxon秩和检验及Spearman秩相关分析) 结果： 1.PI3K在增殖期子宫内膜、良性增生性子宫内膜、EIN、子宫内膜样腺癌中表达依次增高,组间表达差异有统计学意义(p<0.01)。其中良性增生性子宫内膜组的表达高于增殖期子宫内膜组(p<0.01),EIN组的表达高于良性增生性子宫内膜组(p<0.01),子宫内膜样腺癌组的表达高于EIN组(p<0.05),EIN组的表达低于良性增生性子宫内膜组(p0.05)。 4. GSK-3β胞浆的表达在增殖期子宫内膜、良性增生性子宫内膜、EIN、子宫内膜样腺癌组间表达差异有统计学意义(p<0.01)。良性增生性子宫内膜组的表达高于增殖期子宫内膜组(p<0.05),EIN组的表达高于良性增生性子宫内膜组(p<0.01),子宫内膜样腺癌组的表达高于EIN组(p<0.01);与P27表达互为负相关(p<0.01)。PI3K、cyclinD1、GSK-2表达与组别、年龄呈正相关(p<0.01),P27表达与组别、年龄呈负相关(p
目的： 1.检测已经建立的非小细胞肺癌放射抗拒细胞系的放射敏感性。 通常 2.初步探讨PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂LY294002和Rapamycin对大分割放疗的增敏作用。

方法： 1.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。3种细胞均接受射线照射,克隆形成实验检测照射后3种细胞增殖能力的差异；免疫荧光实验检测3种细胞放疗后24h残留的yH2AX焦点的差异。 2.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。实验分组：对照组(A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞)、LY294002组、Rapamycin组、LY294002+Rapamycin组,给予相应的射线照射。通过克隆形成实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞放疗后的增殖能力；通过免疫荧光实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞24h后的yH2AX焦点数。应用SPSS17.0统计分析软件包,实验数据以均数±标准差(x士S)表示,在检验数据正态分布及方差齐性的条件下,多组间数据比较采用方差分析,各组组间差异的比较用LSD—t检验。以P值<0.05),单抑制剂组与A549对照组相比未见明显差异,而双抑制剂组较A549组明显增加(P
优势结构(privileged structures)的概念在1988年被Evans等首次提出,它是指能够与多种受体结合的单一分子骨架(A single molecular framework able to provide ligands for diverse Sorafenib制造商 receptors)。2000年Patchett和Nargund进一步阐述了优势结构的概念：通过合理的结构修饰,能够与多种受体结合的分子骨架称为优势结构,它具有“似先导化合物”、“似药”等性质。优势结构的概念被提出以后,以优势结构为骨架快速构建小分子化合物库,然后通过活性筛选寻找先导化合物的理念,吸引了药物化学家的极大兴趣。本论文的工作主要是围绕噻吩并嘧啶类小分子库的合成方法学研究和多样性导向的化合物库设计、合成及其相关生物活性的评价来展开的。

噻吩并嘧啶是典型的优势结构之一,许多生物活性化合物都含有噻吩并嘧啶结构单元。在本课题组前期对氯代嘧啶类化合物合成方法学研究的基础上,我们设计并合成了具有2-3个不同反应活性位点的噻吩并嘧啶砌块,作为构建该类小分子库的起始原料。基于多样性导向合成策略(DOS),通过亲核取代和Suzuki偶联反应,我们初步合成了一个含有130个化合物的噻吩并嘧啶小分子库1,并在蛋白激酶c-Met、腺苷受体A1R和PI3K等靶点上对这些化合物的生物活性进行了评价： 1)c-Met:结果表明库1中的绝大部分化合物不是很好的c-Met抑制剂。 2)A1R：化合物库1在腺苷受体A1R上初步发现了9个抑制率大于50%的阳性化合物,其中LXY-67是活性最好的化合物,在浓度是5μg/mL时,对腺苷受体A1R的抑制率为91.58%,在活性的基础上我们通过构效关系总结,合成了含有11个化合物的聚焦化合物库2,发现了活性优于LXY-67的化合物LXY-83,在浓度是5μg/mL时,其对腺苷受体A1R的抑制率为92.37%。 3)PI3K：化合物库1在PI3K上初步发现5个抑制率大于50%的阳性化合物。
目的：研究甲基莲心碱(Nef)与伊马替尼(Imatinib)对慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)原代细胞PI3K/AKT通道的影响,进一步探讨Nef增强Imatinib对CML原代细胞敏感性的作用机制,奠定Nef作为增敏剂的药理基础,为CML临床治疗提供新思路。 方法： 1.

L-1)分别与人外周血单个核细胞(PBMC)和Jurkat T细胞共同培养,同时设立不含SB203580的阴性对照组,再用冲击波和PHA或抗-CD3/抗-CD28抗体的亚刺激量作用,检测T淋巴细胞增殖和分泌IL-2的变化。采用免疫印迹法,用抗-p38MAPK抗体及抗-磷酸化的p38MAPK(Thr180/Tyr182)抗体,测定冲击波作用后Jurkat 而且 T细胞上的p38MAPK的表达及磷酸化。结果:与未用冲击波作用组比较,被PHA激活的PBMC细胞,在能量密度为(0.180±0.015)mJ.mm-2的冲击波作用100、150、200、250、300、330和360次时,细胞对3H-TdR掺入量明显增高(P<0.01)。加入SB203580的PHA激活的PBMC细胞,在上述同样强度的冲击波作用时,细胞对3H-TdR掺入量低于没有加入SB203580对照组(P
目的:探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)特异性抑制剂SB203580对新生大鼠高氧肺损伤产生保护作用的机制.方法:160只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤+SB203580组和高氧肺损伤+生理盐水组,建立模型.作用12,24,72h和1wk后,分别处死大鼠.取大鼠72h的左肺以WesternBlot法检测p38MAPK的表达情况,取大鼠4个时相点的右肺以ELISA法检测IL-8和TGF-β1的含量.结果:72h时,高氧肺损伤组和高氧肺损伤+生理盐水组p38MAPK呈阳性表达;在这两个组中,肺组织IL-8和TGF-β1浓度随时间延长呈持续上升趋势,在各时相点均高于空气对照组和高氧肺损伤+SB203580组(P<0.01).结论:SB203580能够通过阻断p38MAPK表达,进而抑制IL-8和TGF-β1表达来减轻新生大鼠高氧肺损伤.
目的探讨p38

MAPK抑制剂SB203580对软骨细胞NF-κB蛋白表达的影响。方法体外培养兔关节软骨细胞,经甲苯胺兰染色鉴定后,一氧化氮(NO)供体NOC-18和p38 MAPK抑制剂SB203580作用于细胞24 h,用MTT比色法检测细胞增殖活性,Western blot测定NF-κB p65亚单位蛋白表达水平。结果与对照组比较,NOC-18能抑制软骨细胞MTT增殖活性(P0.05)。结论p38 MAPK促进了NO诱导的兔关节软骨细胞NF-κB的表达,NO致软骨细胞凋亡的信号通路中涉及了NF-κB的活性表达。
目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖(LPS)诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580(p38蛋白激酶抑制剂)+LPS组、PDTC(NF-κB抑制剂)+LPS组和SB203580+PDTC+LPS组。分别采用免疫细胞化学(SP法)和Western

Cobimetinib分子量 blot检测NF-κB、p38蛋白激酶和NF-κB抑制蛋白(I-κB)的表达。结果与正常对照组相比,LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强,而I-κB的表达显著降低(均P<0.01)。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB,p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比,并显著增强I-κB的表达(均P<0.05)。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞,与LPS刺激组相比,p38蛋白激酶和NF-κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低(P<0.05),I-κB的表达显著增强(P0.05)。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF-κB活化;p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF-κB的活化,NF-κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。
目的探讨超氧化物岐化酶(SOD)在p38有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)介导的肢体缺血预适应(LIP)脑保护中的作用。方法永久凝闭椎动脉的Wistar大鼠,重复夹闭双侧股动脉3次(每次10min,间隔10

JQ1小白鼠 min)作为LIP,之后即刻夹闭双侧颈总动脉8 min造成全脑缺血。SB 203580+LIP+脑缺血组于LIP前30min侧脑室内注射p38 MAPK抑制剂SB 203580 (100μmol·L-1, 25μL)。黄嘌呤氧化酶法测定海马SOD活性,硫代巴比妥酸法测定海马丙二醛(MDA)含量,硫堇染色观察海马的组织学分级。结果LIP显著抑制脑缺血引起的海马CA1区SOD活性下降、MDA含量增加及延迟性神经元死亡。预先侧脑室注射SB 203580显著阻断LIP对缺血脑组织的上述保护作用。结论 SOD可能作为p38 MAPK的下游分子参与LIP诱导的脑缺血耐受。
[目的]探讨朝药鹿茸与特异性p38蛋白激酶(p38MAKP)抑制剂SB203580对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响.[方法]将BABL/c小鼠随机分为正常组、哮喘模型组、鹿茸低、高剂量组、SB203580组.每日分别灌胃给予鹿茸低、高剂量组2,18mg用生理盐水溶解的鹿茸冻干粉0.4mL,腹腔注射给予SB203580组5mg/kg SB203580.分别采用ELISA法和蛋白质印迹法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞分类及计数、炎性细胞因子白细胞介素(IL)-4,IL-5水平及肺组织磷酸化p38MAPK表达,并观察肺组织病理学改变.[结果]与正常组比较,哮喘模型组BALF中炎性细胞计数、IL-4,IL-5水平及肺组织中磷酸化p38MAPK表达水平均显著增高(P<0.05);与哮喘模型组比较,朝药鹿茸低、高剂量组和SB203580组BALF中炎性细胞计数、IL-4,IL-5水平及肺组织中磷酸化p38MAPK表达水平均明显降低(P<0.05).与哮喘模型组比较,朝药鹿茸低、高剂量组和SB203580组肺组织病理学改变均明显减轻(P0.05).[结论]朝药鹿茸和SB203580均具有治疗哮喘作用,其机制与抑制哮喘小鼠p38MAPK信号通路的表达相关.