蛋白激酶在新药研发,尤其是抗肿瘤药物的研发中,是一类重要的靶点,因为它们在一些生理机制的调控中负担重要的角色,包括对细胞的增殖、分化和代谢过程的调控。通过专一的抑制剂阻止细胞的激活和增殖从而阻断信号通路,有益于治疗各种疾病,包括癌症。因此,以蛋白激酶为靶点开发高效的并且、选择性的抗肿瘤药物已经成为研究热点。随着计算机技术的应用和信息科学的迅猛发展,分子模拟方法作为药物研发的重要技术和工具,被应用于潜在靶点蛋白的功能、作用机制和相关作用的信号通路的研究中,发挥了其独特的优势,起到实验无法替代的作用,并可以与很少实验手段进行很好的互补,推动了这一研究领域的长足发展。定量构效关系、分子对接、药效团模型、分子动力学模拟、自由能计算和分子力学与量子力学相结合(QM/MM)等多种分子模拟和药物设计方法,均被成功应用于计算机辅助激酶抑制剂的设计以及激酶作用机此网站制的研究中。本论文应用多种分子模拟的方法(3D-QSAR、分子对接、分子动力学模拟和自由能计算等)研究蛋白激酶和药物小分子的复合体系。基于配体的角度,我们主要研究了药物小分子的结构特征同其生物活性之间的关系；基于受体的角度,我们主要从生物大分子与药物小分子之间的相互作用来考察抑制机理和寻找药物活性成因及差异的分子机制。

近期研究表明Aurora-A可促进肿瘤放化疗抵抗,由于Aurora-A与p53, BRCA1, BRCA2等多种DNA损伤应答蛋白有着相互作用,因此我们推测Aurora-A很可能通过调节DNA损伤应答促进肿瘤放化疗抵抗。 研究目的： 研究Aurora-A与DNA损伤应答的关系,揭示Aurora-A促进肿瘤放化疗抵抗的机理,探寻Aurora-A相关肿瘤的新Everolimus售价型靶向药物分子,以期达到肿瘤治疗的最佳效果。 材料和方法： 第一部分.观察Aurora-A对细胞增殖的影响。 1).在乳腺癌、胰腺癌和卵巢癌细胞中选择Aurora-A低表达的细胞系(MCF-7,PANC-1和OVCA420),和Aurora-A高表达的细胞系(MDA-MB-231, BXPC3和OVCA429),通过反转录病毒法因为转入或沉默Aurora-A。 2).通过细胞计数和软琼脂克隆形成试验分别绘制细胞生长曲线和克隆形成率柱状图。 3)用流式细胞术检测细胞周期进展。 第二部分.检测Aurora-A对肿瘤放化疗抵抗的影响。 1).用放射线,顺铂或者Aurora-A抑制剂VX680处理细胞后,通过流式细胞术检测细胞凋亡水平。 2).用MTT检测顺铂处理AZD2281供应商后的细胞活力,并计算细胞半数抑制浓度(IC50)。 第三部分.探究Aurora-A引起肿瘤放化疗抵抗的机理 第一章.检测Aurora-A与DNA损伤应答的关联 1).免疫荧光检测Aurora-A与γH2AX的关联。 2).免疫印迹检测Aurora-A对DNA损伤应答蛋白(ATM, Chk2, ATR, Chk1, RAD51,H2AX,γH2AX,ERCC2,p53,pp53, AKT1, AKT2)的影响。

RNAi处理13天后,蚕蛹的体重和体长均低于对照组家蚕,而且蚕茧明显变小,茧丝较少。RNAi导致蚕蛾翅膀短小、伸展不开的比例明显升高,高达30%,是未注射组的3倍,是注射si-egfp组的2倍。这些结果说明Bm Vps4在家蚕的变态发育过程中的确发挥了重要的作用。7.用家蚕核型多角体病毒Bm NPV感染家蚕Bm N细胞,采用荧光定量PCR探索了Bm Vps4和Bm购买EPZ-6438 Vta1的基因转录变化情况。实时荧光定量PCR结果发现,Bm Vps4的基因转录在病毒侵染后50、60、90分钟阶段有明显的上调,但在50、60分钟的上调程度要高于在90分钟的上调程度;Bm Vta1则在20、60、90分钟阶段有明显上调,但在90分钟的上调程度要高于前2个时间点。这些发现表明,Bm Vps4和Bm Vta1与Bm NP和V的感染进程有关系,二者的作用既有密切联系,也有一些差异。
天然产物在癌症化学疗法,免疫调节,神经保护,调节能量代谢,抗微生物以及心血管疾病治疗等方面起到了十分重要的作用。他们很可能会给我们提供很多先导化合物的结构,可以作为药物开发的模板用于多种疾病的预防与治疗。本文主要是对天然产物的抗肿瘤活性以及天然产物中的三萜皂苷的免疫调节活性进行BVD 523研究。通过机器学习方法分别建立预测模型,并且找出能够起到描述天然产物相应生物活性的关键化学结构。本文的方法以及结果在以天然产物为基础的药物开发利用,疾病的治疗,以及天然产物的构效关系的研究中起到积极的促进的作用。(1)天然产物抗肿瘤的研究传统的天然产物构效关系的研究方法通常可以获得一些关键的结构特性,比如某些化学键或者化学基团。在天然产物抗肿瘤活性的研究中,通常首先确定这个结构特征对某个单一的癌症类型或者是细胞系的影响。

相反的，BubR1在食管鳞癌细胞过表达后能进一步减低细胞对抗微管药物的敏感性，表现在有丝分裂指数下降。免疫组化检测发现BubR1和C-Myc蛋白表达在食管鳞癌组织中有一致性升高趋势。为了检测是否C-Myc对BubR1有调控作用，构建了BUB1b基因启动子报告质粒，在食管鳞癌中检测是否癌基因C-Myc对BubR1的表达有调控作用。结果发现C-Myc的过表达可为什么以激活BUB1b启动子活性并上调BubR1，而C-Myc抑制剂10058-F4则可减低BubR1的表达并恢复食管鳞癌细胞对紫杉醇诱导的细胞生长抑制，并增强紫杉醇作用下有丝分裂期阻滞。对BubR1在食管鳞癌中表达、药物影响和相关调控机制的研究能进一步了解BubR1在肿瘤中表达异常的原因，为食管鳞癌的有效治疗提供可能的理论依据。 第一和部分BubR1在食管鳞癌标本及细胞株中的表达及临床意义分析 目的：1.检测BubR1在临床食管鳞癌组织及其癌旁组织中表达； 2. BubR1的表达与食管鳞癌病人临床病理特征分析； 3.检测BubR1在三株食管鳞癌细胞株中表达。 方法：1.用定量PCR的方法检测BubR1在50例食管鳞癌病人癌组织和癌旁组织中的表达； 2.统计分析BTalazoparib 价格ubR1的表达水平与病人临床病理特征的相关性； 3.定量PCR和Western Blot方法检测BubR1在食管鳞癌细胞中表达。 结果：1.50例食管鳞癌标本中有36例BubR1表达上调，其中23例肿瘤组织表达超过癌旁组织2倍以上； 2. BubR1的表达与病人临床病理特征无直接相关性； 3. BubR1在食管鳞癌细胞中有较高表达，其中ECA-109细胞中BubR1表达低于KYSE150和KYSE180细胞。

同时我们建立了甲胎蛋白分泌型胃癌PDTX模型来评估靶向治疗的疗效。 结果：我们发现在／AFPGC组中cMet过表达的比例为48.5%,而在非AFPGC组则为20%。在AFPGC组VEGF过表达的比例为71.4%,而在非AFPGC组则为47.1%。同时,我们发现在AFPGC组中cMet和VEGF共同过度表达的比例为42.也许8%,并且这部分AFPGC患者预后更差。我们观察到在cMet及VEGF共同过表达的胃癌PDTX模型中联合靶向cMet (Crizotinib)和V EGF (Bevacizumab)信号通路治疗能提高抗肿瘤作用。 结论：AFPGC中高频率的出现cMet和VEGF共同过表达的情况,并且与不良预后也许相关。这一类特殊的AFPGC类型可能能够从联合靶向cMet和VEGF信号通路中受益。
目的：了解中国食管胃交界腺癌（Siewert II型）中人类表皮生长因子受体2(Human epidermal growth factor recepter2, HER2)的表达情况及其影响因素，为我国食管FK228数据表胃交界腺癌（Siewert II型）HER2检测及靶向治疗服务。 方法：对纳入标准的180例食管胃交界腺癌（Siewert II型）病理标本用免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）方法进行检测，并对IHC检测结果为3+、2+的标本进行荧光原位杂交（fluorescent in situhybridization, FISH），了解其基因扩增情况。

在临床研究PROFILE 1001和PROFILE 1005中,ALK重排阳性NSCLC患者对crizotinib有效率达50%～60%,大多数不良反应为1～2度。Vysis ALK breakapart FISH probe kit为检测ALK重排的标准方法。ALK重排更易出现在不吸烟或少吸烟的肺腺癌患者中。crizotinib的耐药机制比较selleck化学复杂。
世界范围内肺癌位居所有癌症致死的第一位,其中大多数为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。目前,分子靶向治疗是NSCLC的治疗中最有发展前景的部分。近年来,NSCLC新的分子生物靶点例如棘皮动物微管相关类蛋白4与间变性淋巴瘤激酶融合基因越来越受到关注。本文旨在介绍E什么ML4-ALK融合基因的基本结构、临床病理学特征、检测方法、ALK抑制剂及其在NSCLC治疗中的意义。
肺癌是当今世界最常见的恶性肿瘤之一。据统计,每年新发肺癌患者中有大约85%为非小细胞肺癌,而其中又有70%的患者在确诊时已存在局部晚期或远处转移[1]。近年来随着对癌症发病机制的深入研究和分子生物学的发展,出现了以更多特定分子为靶点的抗肿瘤药物。针对EGFR19或21号外显子突变而开发的酪氨酸激酶抑制剂,如吉非替尼、厄洛
非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的分子靶向治疗是目前的研究热点,继EGFR、k-ras基因等靶点之后不断有新的肿瘤标志物被发现,本文将NSCLC中发现的ALK、ROS1、RET融合基因的研究进展及其在NSCLC中的临床、功能和结构特征进行阐述。

本文通过查阅文献对复发性SCLC化疗药物及处于临床试验阶段新型药物最新进展进行总结与评价,寻求最佳治疗方案或有效药物,为临床工作提供一定的指导作用。
研究背景：原发性肝细胞肝癌(hepatocellular cell carcinoma, HCC,简称“肝癌”)是最常见的原发于肝脏的恶性肿瘤,在世界范围内,其发病率占恶性肿瘤的第5位,死亡率居第3位。早期肝癌治疗的主很少要手段是手术切除、肝移植和局部消融治疗,可使患者获得超过50%的5年生存率,但仅不足30%的患者有机会接受根治性治疗,大多数患者发现时已是晚期、或在根治术后复发、转移,需要接受肝动脉栓塞化疗(TACE)、索拉非尼或全身化疗等姑息治疗方法。但无论是接受局部的肝动脉栓塞化疗还是系统性的化疗,多数患者仍将面临因肝癌进展、转移或继发耐药而导致的治疗失Inhibitor Library溶解度败。肿瘤干细胞(cancer stem cell, CSCs)是近年来肿瘤学研究的一个热点。目前认为,CSCs是存在于肿瘤组织中的一小部分具有干细胞特性的细胞群体,它们具有自我更新能力,形成不同分化程度的肿瘤细胞。由于对常规化疗药物和现有的靶向治疗耐药,造成肿瘤增殖、转移和耐药。虽然对CSCs重要性的认识不断加深,但是对于其细胞起源仍存在争议JAK inhibitors in development,究竟是源于正常干细胞发生的恶性转化还是已分化的肿瘤细胞获得的自我更新能力目前还不清楚。有研究显示,化疗药物治疗后可导致未能清除的残留肝癌细胞生物学特性恶化,发生上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)和“干性”(stemness)增强。ID1作为一个癌基因,在恶性肿瘤的发生发展中发挥重要的作用。ID1高表达可使肿瘤细胞获得类似于干细胞的特性,促进肿瘤的转移和耐药。

研究提示,该分子亚型的肺癌患者约占所有患者的5%；同时将EML4-ALK转染入正常细胞后,该细胞可转化为肿瘤细胞,进入体内后将最终定位于肺部形成肿瘤；体内实验证实,表达EML4-ALK融合基因的NSCLC中瘤细胞在应用针对ALK的特异性小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinases inhib或者itors, TKIs)Crizotinib后,肿瘤可显著缩小乃至消失；早期临床试验亦显示,ALK融合型肺癌患者在给予ALK TKI后,其生存获益较标准治疗有显著提高。目前美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration. FDA)已批准将ALKSB431542 TKI应用于发生ALK融合的晚期NSCLC患者。因此,EML4-ALK已成为继EGFR之后NSCLC的一个新治疗靶标。本研究所就收治的连续NSCLC病例进行了流行病学的初步研究,发现EML4-ALK在未经选择的国人患者中,发生率高于已报道的欧美日等发达国家和地区：且多发生于腺Kinase 抑制剂 Library数据表癌患者中。在与EGFR, K-RAS突变等常见肺癌分子事件间的相关性研究发现,EML4-ALK与上述两者基本呈互斥性。目前,ALK作为受体酪氨酸激酶之一,其下游调控细胞恶性转化生长的分子机制和相关关键信号通路尚不清楚,需要依靠流行病学数据提供的概率和趋势,应用高通量的生物信息学手段,从海量数据中总结其独特之处,并根据计算结果对关键分子进行后续的功能验证。

2006年,多靶点药物索拉非尼(Sorafenib)的上市,标志着多靶点靶向性治疗时代的开始。而靶点明确的药物之间联合用药的也是多靶点治疗的策略之一。据报道靶向性抑制Aurora B活性的小分子化合物AZD1152与长春新碱、柔红霉素等具有联用协同作用。因此,我们进一步对化合物S2与其它临床抗肿瘤药物的联合应用能力进行了研究。 首先建立了联合用药在细胞水平上的筛选模型,检测了化合物与十此网站五种抗肿瘤药物在九种肝癌细胞株中的联用能力,并选择联合能力好的Rapamycin做进一步研究。 在细胞水平上,化合物与Rapamycin联用可以抑制多种肝癌细胞株的生长。流式细胞术检测发现,化合物与Rapamycin联用可以引起Sub-G1细胞比例增长。通过western blotting检测到化合物与Rapamycin联用可以抑制Histone H3(SerSCH772984浓度10)的磷酸化水平,初步探明了化合物与Rapamycin联用的机制。在动物水平上,使用了人类QGY裸鼠移植瘤模型检测了化合物与Rapamycin的联用能力,与Sorafenib+Rapamycin阳性对照组相比,化合物与Rapamycin表现出与之相当的联用效果以及较低的毒性。 我们还初步检测到化合物与Sunitinib联用可以抑制包括肝癌、宫颈癌、结肠癌等多LY2835219制造商种肿瘤细胞系的生长,利用流式细胞仪发现化合物与Sunitinib联用可以引起细胞凋亡。此联合应用在体内的效果及其机制正在进一步研究中。 此外,我们还对筛选到的阳性化合物S7及S39做了进一步药效药理的研究。 使用基于Kinase-Glo发光激酶检测法的Aurora B高通量筛选模型检测了阳性化合物对体外Aurora B激酶活性的抑制能力,发现阳性化合物的抑制能力与VX680相当。利用分子对接的方法模拟了阳性化合物与Aurora B的结合作用。

05);B组进一步分化为神经元的阳性率明显高于A、C组,差异有统计学意义(P0.05);半定量RT-PCR观察B组神经干细胞p38αmRNA表达明显高于A、C 2组;MTT法检测与半定量RT-PCR结果相似。结论人胚胎干细胞体外分化过程中,血管内皮生长因子促进神经干细胞分化的作用与p38MAPK通路无关,而VEGF通过激活p38MAPK信号通路,促进神经干细胞进一部分化为神经元。
目的探讨c-Jun氨基末端激酶通路(JNK)和p38通路在癫痫持续状态(SE)大鼠海马中的活性变化规律及其意义。方法建立氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型,在不同时间点用免疫组化法检测海马结构JNK和p38磷酸化状态,并观察组织病理学改变。结果对照组P-JNK极少活化而p38在海马各结构广泛活化。SE 30 min后JNK和p38在海马神经元强烈激活,2 h时达到高峰,6 h后各区均明显减少,12 h后降至基础水平,在所有时间点,JNK和p38在齿状回的活化程度均显著高于CA1和CA3区。海马结构各区可见到许多神经元发生变性和坏死。结论 JNK和p38信号转导通路在氯化锂-匹罗卡品致痫过程中被激活,并可能在发作后参与海马神经元损伤的病理生理过程。
全反式维甲酸(all-trans

retinoic acid,ATRA)诱导细胞分化与上调转录因子Krüppel样因子4(KLF4)表达有关,但目前对ATRA诱导KLF4表达的分子机制尚不清楚.为了研究ATRA在血管平滑肌细胞(VSMC)中诱导KLF4表达的分子机制,本研究观察ATRA对视黄酸受体α(retinoicacid receptorα,RARα)和KLF4表达的影响及RARα介导ATRA诱导KLF4表达所依赖的信号转导途径.实验结果显示,ATRA可显著诱导RARα和KLF4表达,用RARα拮抗剂Ro 41-5253阻断ATRA与受体相互作用后,ATRA诱导的KLF4表达受到显著抑制.用p38 Birinapant体内 MAPK、ERK和Akt抑制剂阻断ATRA与RARα相互作用所激活的信号转导途径后,发现阻断p38 3MA MAPK信号途径显著抑制ATRA诱导的KLF4表达,抑制ERK信号途径使ATRA对KLF4表达的诱导作用明显增强,抑制Akt信号途径不影响KLF4基因表达.表明RARα介导ATRA对KLF4表达的诱导作用,ATRA通过抑制ERK和激活p38

MAPK信号途径发挥其对KLF4基因表达的诱导作用.
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目的:探究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)中药源抑制剂的抗炎机制。方法:iNOS在辅助因子存在情况下,将L-精氨酸转变为L-瓜氨酸的同时产生一氧化氮(NO),过量的NO将导致细胞损伤、组织坏死,进而促进炎症性疾病的发生和发展。结果:iNOS的表达与信号通路中的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路、核因子(NF)-κB通路、蛋白激酶(PK)C通路、环腺苷酸(cAMP)依赖PKA通路、核激素受体过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)通路、磷脂酰肌醇三羟基激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)通路、JAK/信号转导及转录活化因子(STAT)通路、血红素加氧酶(HO)-1/一氧化碳(CO)通路均密切相关。结论:iNOS中药源抑制剂通过各种信号通路而发挥其抗炎作用。
研究显示黄连素具有调节机体糖脂代谢的活性。该文从胰岛素分泌和胰岛素信号通路作用、葡萄糖转运及代谢、低密度脂蛋白受体、AMP激酶活性、脂肪细胞分化及脂质代谢和能量代谢等方面探讨黄连素调节糖脂代谢及其联合调节的作用机制,并就其提示的临床应用前景及面临问题进行了综述。
内皮细胞激活是内皮细胞损伤的始动因素,是引起各种不同程度的炎症反应和细胞凋亡的前提条件 Epacadostat浓度 ;丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK) 是哺乳动物细胞中重要的信号转导通路,其中 p38MAPK 通路在细胞应激、细胞生长、凋亡和炎症等多种生理和病理过程中起重要作用,越来越引起业界的广泛关注,本文就 p38MAPK 信号通路及其与内皮细胞激活的相关性做一综述,旨在进一步对内皮细胞损伤引发心血管疾病研究提供参考资料。
疼痛是一种与组织损伤或潜在损伤相关的不愉快的主观感觉和情绪体验。病理性疼痛包括炎症性疼痛和神经病理性疼痛,是神经元可塑性变化的表现形式之一[1]。外周和中枢的敏感化是疼痛产生的病理基础,细胞内信号转导通路的激活和细胞的可塑性
阿尔茨海默病(Alzheimer’s

disease,AD)是老年痴呆最常见病因。临床以老年斑(senile plaques,SP)和神经纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)为特征,其病理变化以细胞外β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积导致SP的形成及细胞内自我聚集的高度磷酸
目的:研究通窍止咳液增强顺铂对肿瘤细胞内p38的活性。方法:通过Western-Blot检测通窍止咳液对人鼻咽癌细胞CNE2、人肺癌细胞A549内p38活性的变化;通过MTT比色法检测通窍止咳液单用以及联合顺铂对CNE2、A549细胞生长的影响。结果:Western-Blot检测结果显示,通窍止咳液能够激活CNE2和A549细胞内p38,增高细胞内p38的磷酸化水平;MTT检测结果显示高浓度的通窍止咳液可以抑制CNE2、A549细胞的生长,通窍止咳液能增强顺铂对CNE2细胞的细胞毒作用,而对A549细胞则无此作用。结论:通窍止咳液增强顺铂的细胞毒作用可能与其激活p38有关,这一作用为逆转顺铂耐药提供了新的治疗方案。
AIM: To evaluate the efficacy and the safety of azathioprine (AZA) and buthionine sulfoximine (BSO) bylocalized application into HepG2 tumor in vivo.