7%（cobrotoxin40μg/kg组），3-MA（10mmol/kg）、SB203580（5mg/kg）干预后抑瘤率有显著下降。 结论cobrotoxin对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤有生长抑制作用，其抑制作用可能与诱导自噬和活化P38-MAPK通路有关。
目的观察盐酸吡格列酮(Pioglitazone, PIO)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(Mesangial Cells, MCs)P38丝裂原活化蛋白激酶(P38mitogen-activated proteinkinase, P38MAPK)及其介导的氧化应激的影响，探讨其肾保护机制，为糖尿病肾脏病变的防治提供新思路。 方法体外培养大鼠肾小球MCs，随机分为正常对照(NG)组、高糖(HG)组、P38MAPK抑制剂SB203580干预(S)组、吡格列酮低浓度(P1)组、吡格列酮高浓度(P2)组。48h后分别收集细胞及上清液。采用流式细胞术检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species, ROS)水平； Western blot测定磷酸化P38MAPK(phosphory1ated P38MAPK, p-p38)、P38MAPK、p22phox、p47phox蛋白含量；逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription

polymerase chain reaction, RT-RCR)检测细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate,NADPH)氧化酶亚基p22phox、p47phox Osimertinib分子量 mRNA表达；采用比色法检测MCs上清液中的超氧化物歧化酶(superoxide Dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平。 结果 1各组大鼠肾小球MCs ROS水平的比较 与NG组相比，高糖刺激48h后，HG组细胞内ROS生成量增多(P<0.05)。SB203580和PIO预先干预后，细胞内ROS生成量显著降低(P<0.01)。与HG组比较，S组、P1组和P2组P38MAPK磷酸化水平明显降低(P<0.01)。而SB203580和PIO均可减少高糖介导的p22phox、p47phox高表达(P<0.01)，经SB203580和不同浓度PIO干预，SOD和CAT活性不同程度升高，MDA含量减少(P
【目的】通过氯化铝诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）死亡，加入凋亡和程序性坏死的特异性抑制剂及MAPK信号通路的抑制剂，初步探讨铝致神经细胞死亡与MAPK信号通路的关系。

【方法】1.4mmol/L的AlCl36H2O染毒SH-SY5Y细胞模拟铝致神经细胞死亡模型,用凋亡的特异性抑制剂zVAD-fmk（浓度为20μmol/L）抑制凋亡发生，用程序性坏死的特异性抑制剂necrostatin-1（Nec-1，浓度为60μmol/L）抑制程序性坏死发生，检测不同组间细胞活力的变化，用流式细胞术检测凋亡率坏死率的差异，用蛋白印迹法检测MAPK信号通路蛋白及其磷酸化水平的改变。2.4mmol/L的AlCl36H2O染毒SH-SY5Y细胞模拟铝致神经细胞死亡模型，用MAPK信号通路的特异性抑制剂（SB203580、SP600125、U0126浓度分别为10μmol/L，15μmol/L，10μmol/L）抑制相关分子的磷酸化，CCK8法检测细胞活力的变化，流式细胞术检测凋亡率和坏死率的差异，蛋白印迹法检测MAPK信号通路蛋白及其磷酸化水平的改变。

而且 Sorafenib体外 【结果】1. CCK-8法检测细胞活力结果显示与空白对照组、溶剂对照组、zVAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比较，染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的细胞活力下降（P<0.01），与染铝组相比较，程序性坏死抑制组和凋亡抑制组的细胞活力上升（P<0.05）。流式细胞术检测细胞凋亡率与坏死率结果显示，与空白对照组、溶剂对照组、zVAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比较，染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率上升（P<0.01）；与染铝组相比较，凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率下降（P<0.05）；与染铝组相比较，程序性坏死抑制组的p38磷酸化水平下降（P<0.01），与染铝组相比较，SB203580组的细胞活力上升（P<0.01）。2）与空白对照组，溶剂对照组和SP600125对照组相比较，染铝组，SP600125组的细胞活力下降（P<0.01）。3）与空白对照组，溶剂对照组和U0126对照组相比较，染铝组和U0126组差异有统计学意义（P<0.01）；与染铝组相比较，U0126组的细胞活力明显下降（P<0.01）；与染铝组相比较，SB203580组的凋亡和坏死率明显下降（P<0.01）。2）与对照组相比较，染铝组和SP600125组凋亡和坏死率上升（P0.05）。3）与空白对照组和溶剂对照组相比较，U0126对照组，染铝组和U0126组凋亡和坏死率上升（P<0.01），染铝组和SB203580组的p38磷酸化水平升高（P<0.01）；与染铝组相比较，SB203580组的p38信号通路磷酸化水平下降（P0.05）。3)各组的ERK蛋白印迹结果显示与空白对照组、溶剂对照组相比较，U0126对照组、染铝组、U0126组的ERK磷酸化水平下降（P<0.

2-110.2μM)；4)通过抑制PI3K/Akt信号通路,显著抑制Akt的磷酸化水平,并抑制cyclin D的mRNA转录和蛋白表达,使细胞周期阻滞在Go/G1期；5)对mTOR通路无抑制作用。XM002S在体内外均表现出良好的抗肿瘤活性,毒性低,作用机制明确,是一个靶向PI3K/Akt通路的好的苗头化合物。 XM002S分子中存在一个手性中心,作为手性分子,其单一对映体的活性尚不明确,XM002S及其手性分子的合成方法尚未建立,XM002S的构效关系也有待明确。 针对上述问题,本研究以L-脯氨酸和三乙胺混合催化3-乙氧基水杨醛与相应的p-硝基苯乙烯缩合,建立了合成XM002S及其衍生物的新方法。肿瘤细胞生长抑制研究表明,在2位苯环上的对位引入吸电子基团(氰基、氟)对活性有利,而引入供电子基团(甲氧基)则使活性降低。本研究还以(S)-(+)-α-甲氧基苯乙酸为手性拆分试剂,通过建立化学拆分方法,分别合成了单一对映体(R)-XM002S和(S)-XM002S,并证实二者的生物活性没有明显差异,说明该手性中心有可能并非活性必需。因此,通过去除2位的4-氟苯基而使结构进一步简化,合成了非手性化合物3-硝基-8-乙氧基-2H-苯并吡喃(20a)和3-硝基-8-乙氧基-6-溴-2H-苯并吡喃(20b)。这两个化合物均对血液肿瘤细胞生长具有良好的抑制作用,特别是后者的生物活性优于XM002S及活性较高的对映体(R)-XM002S,并显著抑制Akt的表达及其磷酸化水平、诱导肿瘤细胞凋亡。

无 确认细节 综上所述,本研究建立了3-硝基-2H-苯并毗喃衍生物及XM002S单一对映体的合成方法,明确了2位芳环上取代基的电性及手性中心的绝对构型对生物活性的影响；通过简化XM002S的结构,发现了高活性的非手性化合物20b,这为进一步的结构修饰和发现高活性、高选择性的PI3K抑制剂奠定了基础。
目的 在前期研究中发现,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可以诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡,但是其是否能够诱导B16细胞发生自体吞噬目前尚不明确。因此,在前期研究的基础上,通过相差显微镜观察细胞活性、透射电子显微镜(TEM)观察细胞内是否存在自体吞噬泡及其数量的变化,分析TNF-a是否能够诱导B16细胞发生自体吞噬；进一步检测自噬相关基因和蛋白的表达变化,分析参与TNF-α诱导的B16细胞自体吞噬的关键因子；并通过检测自噬信号通路上的标志性基因和蛋白的表达,分析TNF-α诱导B16细胞自噬的信号通路,以及各通路对自噬的调控作用。

方法 1.体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,根据处理方法不同分为对照组、TNF-α处理组(20ng/mlTNF-α处理12h、24h)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+TNF-α处理组(lOmmol/L3-MA预处理2h,20ng/mlTNF-α处理12h、24h)。 2.相差显微镜观察TNF-α处理前后B16细胞的生长状态和细胞活性。

3.TEM观察TNF-a处理前后B16细胞内自体吞噬泡的变化。 4.收取细胞,提取细胞总RNA,聚合酶链式反应(PCR)检测自噬相关基因Atg5、Atg7、Atg12及内质网应激关键基因Chop mRNA的表达变化。 5.收取细胞,RIPA裂解液裂解细胞,提取细胞总蛋白,蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬性死亡标志性蛋白Beclinl、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路及磷酸肌醇3激酶(P13K)/蛋白激酶B(PKB,又称Akt)通路关键蛋白核糖体S6蛋白激酶(p70S6K)及Akt磷酸化水平的变化。 为什么 结果 1.与对照组相比,TNF-α处理后的B16细胞出现明显的生长抑制现象,可见部分细胞死亡,TNF-α处理12h后细胞死亡量约10%,24h后死亡量达30%,具有明显的时效关系。 2.与对照组相比,TNF-α处理后的B16细胞内,可见许多不同阶段的自体吞噬泡。 3.与对照组相比,TNF-α处理12h的B16细胞中,自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和自噬性死亡标志性蛋白Beclinl的表达显著升高,24h较12h降低但仍高于对照组。3-MA+TNF-α处理组,12h时LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平较TNF-α处理组12h下降,24h较TNF-α处理组24h升高。 4.自噬相关基因Atg5、Atg7、Atg12mRNA在TNF-α处理12h、24h后表达水平均显著升高；内质网应激关键基因Chop mRNA表达显著上调,呈时问依赖性。 5.与对照组相比,TNF-α处理组中p70S6K磷酸化水平显著下降,呈时间依赖性；Akt磷酸化水平显著降低,24h较12h升高。3-MA+TNF-α处理组中,p70S6K磷酸化水平在12h较TNF-α处理组升高,24h较TNF-α处理组降低；Akt磷酸化水平较TNF-α处理24h稍低。 结论 1.TNF-α除了可以诱导B16细胞凋亡,还可以诱导B16细胞发生自体吞噬。 2.TNF-α诱导B16细胞的自噬作用达到一定水平后,自噬体的数量不再增加,自噬体的降解逐渐增多,从而导致自噬体数量下降。 3.TNF-α可以诱导B16细胞自噬性死亡。 4.TNF-α通过mTOR通路和PI3K/Akt通路诱导B16细胞自噬。 5.

231），但在N分期中Fli-1的表达有差异（p=0.03）。在小细胞肺癌中，不同性别之间的Fli-1表达水平无差异，同样不同年龄分层之间Fli-1的表达水平无差异。 结论：本研究发现Fli-1在小细胞肺癌组织中的表达水平和表达强度显著高于癌旁组织和非小细胞肺癌组织，Fli-1可成为诊断小细胞肺癌的一种分子学标志物；同时Fli-1在广泛期小细胞肺癌中的表达阳性率和表达强度高于局限期，在IV期中表达强度高于I-III期，它可成为判断小细胞肺癌分期的相关指标。Fli-1的表达水平与淋巴结转移有关，N分期高的小细胞肺癌其Fli-1的表达水平增强，可推测Fli-1在小细胞肺癌侵袭转移中起一定作用。本研究结果推测Fli-1基因在恶性肿瘤进展过程中扮演着重要角色，它可能成为小细胞肺癌的潜在治疗靶点，本研究可为小细胞肺癌的分子发病机制及新型靶向药物研发提供临床数据。
目的:使用荧光共振能量转移试验（FRET-VWF73）的方法，对造血干细胞移植（HSCT）患者移植预处理前及预处理后的ADAMTS13活性及其抑制物进行检测。探讨ADAM-TS13活性减低的原因，评估ADAMTS13的活性及抑制物在移植过程中的意义。

方法:(1)移植病例：取自2010年09月至2011年09月间我院行HSCT的血液系统疾病患者共113例（男66例，女47例），中位年龄32（18～57）岁。按疾病诊断分：急性髓细胞性白血病（AML）39例，急性淋巴细胞性白血病（ALL）24例，慢性髓细胞性白血病（CML）16例，急性杂合细胞性白血病（AHL）4例，淋巴瘤13例，其他17例。按移植类型分：自体移植16例、异基因移植97例（同胞全相合异基因移植48例、无关供体全相合异基因移植30例、单倍体异基因移植10例，脐血干细胞移植9例）。预处理根据移植类型分别采取改良BUCY，TBI+CY，BEAM等方案。 http://www.selleckchem.cn/products/nlg919.html (2)使用FRETS-VWF73荧光底物检测的方法检测113例移植病人预处理前后ADAMTS13的活性。 (3)检测其中83例病人ADAMTS13抑制物的含量：将待测血浆56℃环境中灭活1h，然后取灭活后的血浆与正常人混合血浆混匀后于25℃条件下孵育2h。利用FRETS-VWF73荧光底物检测的方法对孵育后血浆的ADAMTS13活性进行检测。 (4)统计分析：数据采用均数±标准差表示，组间均数比较采用方差分析，两样本平均值的比较采用t检验，率的比较采用卡方（X2）检验，以P
目的：探讨蓝萼甲素（Glaucocalyxin

A,GLA）对人肺癌A549细胞的抑制作用及其作用机制，为GLA的抗肿瘤作用及用于临床提供进一步的实验依据。 方法：以不同浓度的GLA干预体外培养人肺癌A549细胞,用MTT法观察其对A549细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化; Hoechst33258染色观察给药后A549细胞核形态的变化，透射电镜（TEM）观察A549细胞超微结构的改变,扫描电镜(SEM)观察A549细胞表面结构改变;western blot法检测GLA对caspase-3、8和PARP蛋白表达的改变。RT-PCR方法检测GLA对A549细胞内caspase-3、8和PARP基因表达的影响。实时定量(Real AC220 花费 time)PCR检测A549细胞内microRNA30a的表达情况。 结果：GLA对体外培养A549细胞具有增殖抑制作用（P＜0.05，P＜0.01），并呈剂量和时间依赖趋势；Hoechst33258染色后，荧光显微镜下可见A549细胞胞核致密浓染;TEM观察可见A549细胞核皱缩、染色质边集等细胞凋亡的特征性改变；SEM观察可见A549细胞微绒毛减少，部分细胞膜表面出现一些大小不一的凹陷或孔洞。流式细胞仪PI单染结果显示不同浓度GLA作用A549细胞48h后，S期细胞比例增加（P＜0.05）；AnnexinⅤ-FITC双染结果显示不同浓度GLA作用于A549细胞48h后,细胞凋亡率逐渐增加（P＜0.01），3-甲基腺嘌呤(3-MA)与GLA联合应用可使细胞凋亡率增加（P＜0.05）；GLA干预A549细胞后Western 查找更多 blot检测结果:caspase3、caspase8、PARP蛋白表达上调，且均呈剂量依赖趋势；RT-PCR结果：caspase-3mRNA、caspase-8mRNA、PARPmRNA的表达上调（P＜0.05），Real time PCR结果表明，microRNA30a表达下调（P＜0.05）。 结论：蓝萼甲素(GLA)对体外培养人肺癌A549细胞的增殖具有一定的抑制作用,并可诱导细胞凋亡和自噬，且可使A549细胞阻滞在S期，其诱导细胞凋亡的机制可能与激活caspase-8信号通路和下调microRNA30a有关。
研究背景 依他尼酸(EA)是一种谷胱甘肽转移酶(GSTπ)抑制剂,具有较弱的抗肿瘤活性。但由于EA生物利用度低,副作用大,限制了其在临床的进一步应用。根据生物等电子重排原理,我们设计并合成了一系列EA嗯二唑衍生物,通过筛选,发现化合物5-[2,3-二氯-4-(2-亚甲基-1-代丁基)氯苯]-3-甲基-1,2,4-噁二唑(6r)具有较高的抗肿瘤活性,具有进一步研究成为抗肿瘤药物的价值。

实验方法 体外实验：MTT法评价化合物6r对一系列肿瘤细胞增殖的抑制作用,并选取敏感细胞株人结肠癌SW620细胞及人前列腺癌PC3细胞进一步研究。Hoechst33258染色法,FITC-AnnexinV/PI双染法检测6r对肿瘤细胞凋亡的影响；碘化丙啶(PI)单染法检测6r对肿瘤细胞周期的影响。Western blotting法检测6r对肿瘤细胞中GST71, EGFR, PI3K/Akt信号通路分子及周期蛋白Cyclin D1表达水平的影响。 体内实验：分别构建裸鼠皮下接种结肠癌SW620细胞移植瘤,皮下接种前列腺癌PC3细胞移植瘤以及原位接种标靶荧光素酶基因前列腺癌PC-3M-Luc-C6细胞移植瘤模型,以6r治疗组,5-氟尿嘧啶(5-Fu)或米托蒽醌(Mitoxantrone, MA)阳性对照组及溶剂阴性对照组进行裸鼠实验。采用尾静脉方式给药,隔天给药并连续给药数周。实验结束后,处死裸鼠,取出肿瘤并称重,通过与阴性对照组比较评价6r体内抗肿瘤活性。Western blotting法检测6r对肿瘤组织中GSTπ,凋亡相关蛋白Caspase-3, bcl-2/Bax, Cyt-C及EGFR/PI3K/Akt表达的影响 实验结果 体外实验结果：体外生长抑制试验结果表明,6r对大多数肿瘤细胞具有较强的抑制作用,对SW620及PC3肿瘤细胞半抑制率IC50分别为4.89μM和3.79μM,选取敏感肿瘤细胞株PC3及SW620进一步实验。Hoechst33258染色结果显示,2μM,4μM6r可明显诱导肿瘤细胞凋亡。荧光显微镜观察,SW620及PC3细胞核染色质浓染,固缩或聚核膜周边,或呈块状碎裂改变。FITC-AnnexinV/PI双染法试验结果表明,4μM6r处理SW620及PC3肿瘤细胞24h凋亡率分别为28.8%和29.

One group of representative targeted oncogenic kinases,the receptor tyrosine

kinases(RTKs),has been associated with gastric cancer development.Trastuzumab,an inhibitor of ERBB2,has been approved for the treatment of gastric cancer,although other receptor tyrosine kinases,such as epidermal growth factor receptor,vascular endothelial growth factor,platelet-derived growth factor receptor,c-Met,IGF-1R and fibroblast growth factor receptor 2,are also activated in gastric cancer.The promising 没有 results of the trastuzumab clinical trial for gastric cancer resulted in the approval of trastuzumab-based therapy as a first-line treatment for human epidermal growth factor receptor 2-positive patients.On the other hand,the trial examining bevacizumab in combination with conventional chemotherapy did not meet its primary goal of increasing the overall survival time of gastric cancer patients;however,a significantly higher response rate and a longer progression-free survival were observed in the bevacizumab arm of the trial.Other clinical trials,especially phaseⅢtrials that have tested drugs targeting

RTKs,such as cetuximab,panitumumab,gefitinib,erlotinib,figitumumab,sorafenib,sunitinib and lapatinib,have shown that these drugs have modest effects Alisertib制造商 against gastric cancer.This review summarizes the recent results from the clinical trials of molecularly targeted drugs and suggests that further

improvements in the treatment of advanced gastric cancer can be achieved through the combination of conventional drugs with the new molecularly targeted therapies.
系统阐述非小细胞肺癌(NSCLC)患者EGFR-TKI耐药的分子机制及目前已知的治疗策略。资料来源于PubMed数据库及万方数据库。选取2005~2013年发表在核心期刊上的关于非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药机制或耐药后治疗的文献,综合达成共识的数据资料,得出数据综合的结果和结论:目前已知的EGFR-TKI耐药的分子机制有T790M突变、C-Met基因扩增、BIM多态性缺失、K-ras基因突变、BRAF基因突变、EML4-ALK融合基因突变及转化为小细胞肺癌等,但针对各种耐药机制开发的药物多处于临床前或临床研究阶段,这些药物的研究为实现肺癌个体化治疗提供了可能。
Hsp90作为热休克蛋白家族中的重要一员,是一种对细胞生存所必需的分子伴侣,它发挥着稳定顾客蛋白构象、维持其功能的作用。许多顾客蛋白在肿瘤中处于过度表达或持续激活状态,与肿瘤的发生发展有着密切的关系。因此,Hsp90在近年的研究中倍受关注,已经发展为抗肿瘤治疗的良好靶点,目前已经有多个Hsp90抑制剂进入临床实验。近年随着肿瘤分子生物学的研究,肿瘤分子靶向治疗已取得明显成果,针对多种癌症已获得了多个用于靶向治疗的单克隆抗体或小分子化学物质,如用于治疗某些HER2阳性乳腺癌的曲妥珠单抗、用于治疗NSCLC的吉非替尼等。然而随着这些药物的应用,肿瘤耐药性不可避免的产生。多方面研究表明Hsp90抑制剂会引起与耐药相关的多个分子的降解,提示其在拮抗耐药方面具有重要的意义。本文就Hsp90分子抑制剂在拮抗肿瘤耐药方面的研究进行综述。
1前言一些遗传学确定的癌症依靠单一过度活跃的癌基因来增殖和生存,这种现象称之为”癌基因成瘾(oncogene AZD2281细胞系 addiction)”,如慢性髓细胞性白血病的BCR-ABL融合基因,非小细胞肺癌(non-smallcell lung cancer,NSCLC)的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因的活
1文献来源研究一:Zou HY,Li Q.An orally available small-molecule inhibitor of c-Met,PF-2341066,exhibits cytoreductive antitumor efficacy throughantiproliferative and antiangiogenic mechanisms[J].Cancer Res,2007,67(9):4408-4417.研究二:Tanizaki J,Okamoto I.

MicroRNA-145通过TGF-β1信号通路促进了升主动脉瘤患者主动脉壁中层结构重塑目的：升主动脉壁中层结构重塑是升主动脉瘤患者主动脉壁的主要病理特征,但是,导致升主动脉瘤患者主动脉壁中层结构重塑的机制仍未完全阐明。有研究报道MicroRNA-145是新进发现的可调节平滑肌细胞寿命和可塑性的细胞因子。本研究将检测升主动脉瘤壁中MicroRNA-145的表达,并检测MicroRNA-145在升主动脉瘤患者主动脉壁中层结构发生重塑过程中的作用。方法：手术过程中获取10例因升主动脉瘤接受升主动脉置换术的患者的主动脉壁为病例组标本,对照组主动脉壁组织来自于因冠状动脉粥样硬化需进行冠状动脉搭桥手术的患者的升主动脉壁。研究过程中,应用H-E染色和Masson三色染色分别检测升主动脉壁形态学变化和升主动脉壁中胶原纤维的变化,应用实时定量反转录酶-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测主动脉壁中microRNA-145的表达量,应用western

blot技术检测升主动脉壁中骨桥蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达量。通过体外细胞培养,获取人体升主动脉壁平滑肌细胞,应用MicroRNA-145模拟物和抑制物外在干预升主动脉壁平滑肌细胞,观察MicroRNA-145的表达水平对升主动脉平滑肌细胞产生骨桥蛋白和Ⅲ型胶原蛋白作用的影响。然后应用MicroRNA-145模拟物和TGF-β1 siRNA共同作用于升主动脉壁平滑肌细胞,观察抑制TGF-β1的表达对MicroRNA-145促进升主动脉壁平滑肌细胞产生骨桥蛋白和Ⅲ型胶原蛋白作用的影响。结果：与正常对照组相比,升主动脉瘤患者主动脉壁中MicroRNA-145.骨桥蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达明显增加(P
目的：以小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白配体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor-related protein ligand, 那个 mGITRL)作为共刺激分子在体外诱导Thl7细胞分化,研究参与该过程的信号分子,寻找其作用机制；建立小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)模型,并用mGITRL蛋白进行处理,研究GITR/GITRL通路下游信号分子对CIA发病的影响,寻找其可能的作用机制。方法：(1)免疫磁珠法分离小鼠脾脏来源的CD4+CD62L+初始型T细胞,以1×106/孔的浓度将初始型T细胞在Th17细胞不完全诱导体系中培养,体系中含有预包板的抗CD3

无 mAb (1μg/ml),游离的TGF-β(3ng/ml)、IL-6 (30ng/ml)、IL-23 (30ng/ml).抗IL-4 mAb (5μg/ml)以及抗IFN γmAb (5μg/ml),再将mGITRL蛋白(1μg/ml)以及对照蛋白(1μg/ml)分别加入体系中,72h后通过流式细胞术检测Th17细胞的比例变化。(2)在小鼠初始型CD4+T细胞培养孔中加入抗CD3 mAb以及mGITRL蛋白,37℃、5%C02培养72小时,然后再加入不同浓度的mGITRL蛋白(0、0.5、1.0、2.0μg/ml)作用20mins>或者加入1.0μg/ml mGITRL蛋白作用不同时间(0、20、40、60mins),通过Western-Blot检测胞内p38 MAPK磷酸化水平。将1nGITRL蛋白、mGITRL蛋白+SB203580 (p38 MAPK抑制剂,5μM)以及mGITRL+DMSO(SB203580的溶剂)分别加入小鼠Th17细胞不完全诱导体系中(体系成分同上),培养72h,通过流式细胞术检测Th17细胞的比例变化,收集细胞培养上清,通过ELISA检测上清中IL-17A的水平。在小鼠Th17细胞不完全诱导体系中,加入mGITRL蛋白以及不同浓度的SB203580 (0、2.5、5、7.5、10μM),检测Th17细胞的比例、IL-17和RORγt mRNA的表达水平,培养上清中IL-17A的水平变化情况。将mGITRL蛋白、mGITRL蛋白+SB203580以及mGITRL+DMSO分别加入小鼠Th17细胞不完全诱导体系中(体系成分同上)培养72h后,通过qRT-PCR检测IL-21mRNA的表达水平变化；收集细胞培养上清,ELISA法检测上清中IL-21的水平变化。(3)在小鼠初始型CD4+T细胞培养孔中加入抗CD3

mAb以及mGITRL蛋白,37℃、5%CO2培养72小时,再经过不同浓度的mGITRL Cell Cycle抑制剂 (0、0.5、1.0、2.0μg/ml)刺激相同时间(20mins),或经过相同浓度(1.0μg/ml)的]mGITRL蛋白处理不同时间(0、20、40、60 mins),然后通过Western-Blot检测胞内STAT3 Tyr705以及Ser727位点磷酸化水平；用SB203580 (p38 MAPK抑制剂)预处理活化的初始型T细胞不同时间(30、60、90mins)之后,再经过mGITRL蛋白刺激,通过Western-Blot检测胞内STAT3 Tyr705以及Ser727位点磷酸化水平。将mGITRL蛋白、mGITRL蛋白+Stattic (STAT3抑制剂)以及mGITRL+DMSO (Stattic的溶剂)分别加入小鼠Th17细胞不完全诱导体系中(同前),在Th17细胞诱导条件下培养72h,收集细胞培养上清,ELISA法检测上清中细胞因子IL-17A以及IL-21的水平变化；收集培养结束的细胞,通过qRT-PCR检测IL-21mRNA的表达水平。(4)将牛Ⅱ型胶原(CⅡ)与等体积的弗氏完全佐剂1：1混合,充分研磨直至混合物完全乳化,取乳化物(100μg CⅡ/只)于小鼠尾根部皮内注射。初次免疫当日为第0天,于初次免疫后第21天用C II与弗氏不完全佐剂的乳化物加强免疫,诱导小鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型。将小鼠随机分成三组：CIA-GITRL组、CIA-GITRL-SB203580组以及CIA-GITRL-Carrier (SB203580的溶剂)组(每组6只),在初次免疫后第22天给予CIA-GITRL组小鼠连续5天进行尾静脉注射mGITRL蛋白(20μg mGITRL蛋白溶于100μlPBS缓冲液中)；在初次免疫后第20天给予CIA-GITRL-SB203580组小鼠尾静脉注射SB203580 (2.

5天和分化1天NSCs中片状伪足出现在5ng/ml的SDF-1α刺激15min左右，而分化3天的NSCs细胞边缘在同样刺激下未出现类似伪足结构。 4.不同分化状态的NSCs中，PI3K/Akt和MAPKs信号通路对SDF-1α的应答水平不同。在5ng/ml的SDF-1α刺激不同时间段（0、5、15、30、60min）或不同浓度SDF-1α（0、5、25、50、100ng/ml）处理30min后，在不同分化状态NSCs中PI3K/Akt和MAPKs信号通路的激活状态所对应的SDF-1α浓度、SDF-1α刺激时间段以及活性持续时间均不相同。 5. PI3K/Akt和MAPKs对不同分化状态的NSCs趋化性迁移发挥的调节作用各不相同。已证明细胞的群体趋化性迁移、迁移速度和迁移效率都与细胞所处的分化状态密切相关的，与迁移相关的信号通路在不同分化阶段的细胞中发挥不同程度的调节作用，说明细胞的分化状态可以改变信号通路在细胞中的激活水平，进而改变细胞内部调控细胞迁移行为的分子机制，最终引起细胞趋化性迁移行为的改变，在分子水平上对细胞分化状态影响迁移能力做了初步解释。

本研究为提高NSCs移植临床治疗手段成功率提供新思路，首次将干细胞分化状态对迁移的影响纳入研究范围，为寻找更稳定高效的治疗途径提供广阔的视野。
目的：观察黄连碱(Coptisine)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性细胞因子NO、TNF-a和IL-1B的作用以及对p-ERK1/2、IκBα和iNOS蛋白表达的影响,探讨黄连碱体外抗炎作用及其机制。 方法：用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞,建立细胞炎症反应模型： (1)选择一氧化氮(NO)为指标,筛选黄连中五个主要成分的抗炎活性； JQ1 (2) Am-Blue细胞增殖与活性检测试剂(SunBioTM)检测黄连碱对RAW264.7巨噬细胞增殖的影响； (3) Griess法检测细胞培养上清液一氧化氮(NO)含量； (4) ELISA法检测细胞培养上清液肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白介素-1B(IL-1B)含量； (5) Western Blot技术检测RAW264.7巨噬细胞p-ERK1/2、IκBα和iNOS蛋白的表达。 结果：(1)黄连五个主要成分中小檗碱、黄连碱和巴马汀都能明显抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO的释放(p0.05)；

(3)黄连碱10μM组、30μM组NO释放量均明显低于LPS组(p0.05),BAY11-7082组NO释放量明显低于LPS组(p<0.05),其释放量随着剂量的增加而减少,BAY11-7082组TNF-a和IL-1B释放量明显低于LPS组(p0.05)；PD98059组p-ERK1/2蛋白表达明显低于LPS组(p0.05)；空白对照组RAW264.7巨噬细胞IκBα蛋白表达最高；LPS组IκBα蛋白表达最低,与空白对照组比较有显著性差异(p<0.05),其表达量随着剂量的增加而减少；BAY11-7082组iNOS蛋白表达明显低于LPS组(p
目的：本课题通过LPS诱导的RAW264.7细胞,建立体外炎症细胞模型,观察芦荟大黄素对LPS诱导RAW264.7的细胞释放NO、TNF-a和IL-1β的影响,以及芦荟大黄素对ERK、iNOS蛋白表达和NF-κB信号通路下游基因表达的影响,探讨芦荟大黄素抗内毒素作用及其机制。 寻找更多 方法：采用MTT法,制备RAW264.7细胞生长曲线；采用Griess法,检测芦荟大黄素对LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO量；采用ELISA,检测芦荟大黄素对LPS诱导的RAW264.7细胞释放的TNF-a和IL-1β量；采用Western blot法,研究芦荟大黄素对LPS诱导的RAW264.7细胞ERK、iNOS蛋白表达和磷酸化水平的影响；采用瞬时转染技术,研究芦荟大黄素对LPS诱导RAW264.7NF-K B信号通路下游基因表达的影响。 结果：1.40μM、20μM、15μM、1OμM、5μM、0.1μM的芦荟大黄素对RAW264.7细胞增殖没有显著的影响。 2.阳性药10μM NF-κB抑制剂BAY-11-7082以及20μM芦荟大黄素、20μM大黄酸、40μM大黄素对LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO的抑制作用明显,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。 4.在1μg/ml的LPS刺激下,RAW264.7细胞中iNOS蛋白表达、ERK蛋白磷酸化水平水平显著提高。而在芦荟大黄素存在的情况下,LPS刺激后的iNOS蛋白表达、ERK磷酸化水平显著降低。本实验结果说明芦荟大黄素能够抑制由LPS引起的细胞内iNOS蛋白表达、ERK磷酸化水平。 5.TNF-a能刺激HELA细胞表达更多的NF-κB,模型组与空白组有显著性差异(P<0.01),阳性药BAYll-7082能显著抑制TNF-a刺激的HELA细胞活化本课题来源于国家自然科学基金：项目编号：81073118NF-κB,并且与模型组比较差异有统计学意义(P
目的：研究布比卡因对福尔马林炎性疼痛模型中脊髓胶质细胞及炎性因子的影响。

方法：成年雄性SD大鼠，体重200-220克，取大鼠72只，随机分为4组,假手术组：右足底掌部皮下注射0.1mL生理盐水；炎性痛组：右足底掌部皮下注射2.5%福尔马林试剂0.1mL，建立福尔马林炎性痛模型；布比卡因组：经蛛网膜下腔注射0.125%布比卡因40μL后同炎性痛组建立炎性疼痛模型；生理盐水组：经蛛网膜下腔注射40μL生理盐水后同炎性痛组建立炎性疼痛模型。于建立右足底掌部炎性疼痛模型的术前、术后1d、术后3d和术后5d分别观察机械缩足反射阈值（MWT）及累积疼痛评分，并于术后行为学实验结束后取L4-6脊髓进行Western blot方法测定脊髓小胶质细胞标记物（OX42）和星形胶质细胞标记物（GFAP）的蛋白表达水平及测定IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平。 Selleckchem BIBF-1120 结果：术后1d，与炎性痛组和生理盐水组相比，假手术组及布比卡因组大鼠MWT增高；累积疼痛评分下降（P＜0.05）；与假手术组相比，炎性痛组和生理盐水组大鼠脊髓OX42和GFAP的表达增加（P＜0.05）；与炎性痛组和生理盐水组相比，布比卡因组大鼠脊髓OX42和GFAP的表达降低（P＜0.05）。与假手术组相比，炎性痛组和生理盐水组大鼠脊髓IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达上调；与炎性痛组和生理盐水组相比，布比卡因组大鼠脊髓IL-1β、TNF-αmRNA表达下调（P＜0.05），而IL-6表达水平在两组间的差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论：在炎性疼痛模型中，布比卡因可抑制脊髓胶质细胞OX42和GFAP的表达及炎性因子IL-1β、TNF-α释放。
目的 体外条件下从大鼠骨髓中分离出单个核细胞,使用特定的培养基使其向内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)分化生长,以Ad-GFP缺陷性腺病毒为载体将HGF基因转染原代培养的大鼠血管内皮祖细胞,之后注入缺血后肢裸鼠体内,观察其体内血管生成能力。 方法 1.

36pg／mL；9h组sTNFR1的量为189.36pg／mL。表明MMP-9促进SW1116细胞表面TNFR1脱落形成sTNFR1且与时间有一定的关系。 六、MMP-9作用前后SW1116细胞TNFR1的表达与细胞培养上清中sTNFR1的关系：经线性相关分析显示两者呈明显负相关 结论 一、大肠癌细胞株表达TNFR1 二、MMP-9促进SW1116细胞表面TNFR1脱落形成sTNFR1，但有剂量和时间依赖性。MMP-9下调大肠癌细胞表面TNFR1的表达，可能与大肠癌侵袭转移密切相关。
目的：探讨补阳还五汤及其有效组分生物碱、苷对血小板衍生生长因子BB

还有 (PDGF-BB)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其细胞周期和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导的机制。 方法：以含药血浆(终浓度10%)作用于VSMC,3小时后加入PDGF(终浓度10ng／ml),24小时后以MTT比色法测定生长曲线,以免疫荧光流式细胞分选术(FACS)测定细胞周期,以流式细胞术(FCM)测定细胞周期相关蛋白c-fos、P21、cyclinD1、PCNA和CDK4的表达,以免疫蛋白印迹法(western blot)测定P-ERK1/2、P-JNK1/2和MKP-1的表达。 结果：①PDGF-BB作用于VSMC后,可诱导VSMC增殖(P<0.05)。补阳还五汤及其有效组分生物碱、苷含药血浆可抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖(P<0.05)和上调MKP-1的表达(P
目的:观察吴茱萸碱(evodiamine,EVO)对野百合碱(monocrotaline,MCT)所致大鼠右心室肥厚的影响并探讨其可能的机制。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机均分6组,正常对照组、模型组、EVO低(20

mg·kg~(-1))、中(40 mg·kg~(-1))、高剂量组(80 mg·kg~(-1))和阳性药硝苯地平(nifedipine,Nif)(20 mg·kg~(-1))除正常对照组外各组大鼠于实验开始时单次i.p.2%MCT 60 mg·kg~(-1)制模,对照组则i.p.等容积生理盐水。24 h后各组分别灌胃给药,正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续18 d。测定各组大鼠的右心室收缩压(RVSP)、右室肥厚指数(右心室/(左室+室间隔)RVHI)、右心重/体重(RVW/BW)、肺湿重/体重(LW/BW);肺组织H.E.染色观察肺小动脉形态学的改变,透射电镜观察右心室心肌细胞超微结构的变化,Real time PCR检测心肌组织心房利钠因子(ANF)、钙调神经磷酸酶(CaN)、细胞外信号调节激酶1(ERKl)mRNA的表达,免疫组化法检测心肌组织CnA和MKP-1表达的情况。结果:与模型组比较,EVO低、中、高剂量预防给药均使RVHI、RV/BW明显降低(P＜0.05),并降低MCT所致大鼠RVSP的增高,使MCT所致大鼠肺动脉重构减轻,能缓解心肌细胞超微结构的损伤,ANF mRNA表达明显下调。另外,EVO能降低能降低心肌组织CaNmRNA和CnA蛋白以及ERK1 mRNA的表达,而提高MKP-1蛋白的表达。结论:EVO能明显防治MCT诱导的大鼠右心室肥厚,其机制至少通过以下途径:①抑制肺动脉重构,降低肺动脉压力,是其抗心肌肥厚机制之一,但对心脏的直接作用因素不能排除;②EVO的抗心肌肥厚作用与其抑制CaN和MAPK信号转导通路有关。
中波紫外线(UVB)诱导的皮肤炎症主要表现为活性氧(ROS)水平上调、炎症细胞迁移和趋化以及炎症因子表达和释放。本文着重从昆明种小鼠背部皮肤表皮和真皮两个方面,考察了有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)／核转录因子(NF-κB)信号途径和自噬(Autophagy)在UVB诱导炎症发生中的作用；并对天然单体水飞蓟宾发挥保护作用的机制进行了初步研究。MAPK蛋白激酶家族包括ERK激酶、JNK激酶和p38激酶,三者位于胞内信号通路下游,激活后通过活化转录因子,启动功能蛋白质相应的靶基因表达,引起细胞功能发生改变。MAPK蛋白激酶家族通常参与有关细胞的生长、增殖、分化以及应激等胞内多种信号的传递,与之相关的信号通路在真核生物进化中均较保守。NF-κB可参与白细胞介素、肿瘤坏死因子、干扰素、生长因子、趋化因子、一氧化氮合酶、环氧合酶等炎症介质的表达,在激活与早期细胞内或细胞间防御反应如获得性免疫和炎症反应有关的细胞因子中发挥重要作用。自噬是受细胞精密调节的清除异物和降解自身产物的过程,负责修复受损细胞和维持细胞正常生长、发育和分化；作为细胞内细胞器和其它结构自然修复和更新的正常途径,广泛存在于正常的细胞内。本研究发现,UVB通过激活MAPK家族,分别抑制和促进表皮层和真皮层细胞的自噬,上调表皮层和真皮层细胞内的NF-κB活化水平,启动炎症因子的转录和翻译,最终引发皮肤炎症。此外,我们还发现水飞蓟宾在整体、组织和细胞形态、氧化损伤和ROS水平、MAPK/NF-κB信号通路的激活以及自噬的调节等方面对UVB引起的损伤均发挥了明显的对抗作用。综上所述,我们认为UVB照射引起的皮肤炎症与MAPK/NF-κB途径和自噬有关,天然药物水飞蓟宾能够明显抑制上述UVB的致炎作用。
IL-24(白细胞介素24)具有抑制肿瘤血管生成活性、刺激免疫系统应答和诱导肿瘤细胞凋亡的方式联合发挥抗肿瘤效应。大多数肿瘤细胞尤其是实体瘤细胞表面有大量EGFR

通常 www.selleckchem.cn/products/ABT-263.html (Epithelial Growth Factor Receptor,表皮生长因子受体)的表达。表皮生长因子肽段中的C环是EGFR特异性结合位点,称为EGF受体干扰序列(EGFRi,Epithelial Growth Factor Receptor interference)。EGFRi能与表皮生长因子特异性结合,但不具有刺激肿瘤细胞生长的作用,特异的肿瘤靶向性和IL-24独特免疫学作用的有机结合为肿瘤的细胞因子治疗提供了新的思路。本论文应用重叠延伸PCR(Overlapping PCR)技术将IL-24与EGFRi连接,并研究了该融合基因在大肠杆菌中的表达和对重组菌的发酵条件进行了优化,同时对纯化的融合蛋白进行抑瘤活性研究。主要研究内容和结果如下： 1.IL-24的克隆及在大肠杆菌中表达 以含有切除了N端信号肽的IL-24成熟肽基因的质粒PMAL-c2x-IL-24为模板,通过PCR技术获得IL-24,构建表达载体PET-22b-IL-24,将其电转化到E. coli BL21(DE3)中,IPTG诱导后表达产物的相对分子质量与预期值(19 kD)一致。利用Ni2+亲合层析柱纯化诱导表达的的IL-24蛋白,MTT检测结果证实其具有体外抑瘤活性,利用Ni2+亲合层析柱纯化诱导表达的的IL-24蛋白,MTT检测结果证实其具有体外抑瘤活性。 2.

54±4.1%、43.3±7.5%(与对照比p>0.05)、15.64±3.5%(与对照比p0.05)、62.64±9.6%(与对照比p0.05)和27.0±4.9%(与对照比p<0.05)、88.83±7.65%(与对照比p<0.05)：Jurkat细胞凋亡率分别为2.12±0.47%、41.26±12.30%(与对照比p<0.05)、70.08±8.52%(与对照比p
第一部分中国人非小细胞肺癌PIK3CA基因突变研究肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,在肿瘤相关死亡率中居首位。其中,约85%是非小细胞肺癌,主要包括鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌等。近来年,尽管外科手术治疗、肿瘤含铂化疗和以吉非替尼、厄罗替尼为代表的靶向治疗等取得了长足的发展,但全球范围内非小细胞肺癌的5年生存率仍只有10%-15%。研究表明,磷脂酰肌醇3激酶(P13K)通路与肿瘤生成密切相关。靶向于P-13K通路成员的抑制剂被证明有明显抗肿瘤作用并已进入临床试验。然而,对PIK3CA基因突变、扩增以及PI3K

selleck Kinase 抑制剂 Library P110 α, p-Akt, mTOR, PTEN表达的综合分析罕有报道。中国人非小细胞肺癌PIK3CA基因突变及与其他驱动癌基因突变关系仍不很清楚。弄清以上问题,将有利于了解中国人群PIK3CA基因突变现状并有助P13K靶向药物患者选择。基于以上情况,我们开展本部分研究,回顾分析复旦大学附属肿瘤医院1117例临床肺癌手术切除新鲜冰冻标本,提取RNA,逆转录为cDNA后进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。对PCR产物进行基因测序检测PIK3CA(9号外显子和20号外显子),EGFR(18-21号外显子),KRAs(2号和3号外显子),HER2(18-21号外显子),BRAF(11-15号外显子),AKT1(2-3号外显子)的基因突变以及ALK(EMLL4-ALK，KIF5B-ALK和TFG-ALK)基因融合情况。对研究中发现的PIK3CA突变标本及野生pIK3CA对照标本(连续收集自2008年7月至2009年6月肺鳞癌、腺癌野生PIK3CA样本),以荧光原位杂交(fluorescent

in situ hybridization, FISH)法检测PIK3CA基因拷贝数,以免疫组织化学法(immunohistochemical,IHC)检测PI3K P110 α, p-Akt, mTOR和PTEN的表达。研究发现,1117例非小细胞肺癌中共有34例PIK3CA基因突变,807例腺癌和310例鳞癌中PIK3CA的突变频率分别为2.7%和3.9%。在34例PIX3CA突变中,17例伴EGFR突变,4例伴KRAS突变。PIK3CA基因突变与PI3K P110α(p=0.0001), p-Akt(p=0.024)以及mTOR(p=0.001)表达呈正相关,但与PIK3CA基因拷贝数无明显相关性(p＝0.463)。仅存在PIK3CA突变患者的总生存时间较pIK3CA-EGFR/KRAs共突变者明显缩短(p=0.004)。在无EGFR/KRAS突变的亚组,PIK3CA突变提示预后不良。本部分研究成果表明,中国人非小细胞肺癌患者PIK3CA基因突变多合并有EGFR或KRAS突变；单一PIK3CA突变提示预后不良：无EGFR/KRAS突变亚组PIX3CA突变提示预后不良。本课题的研究结果可以对临床肺癌癌基因驱动突变筛选提供参考,有利于PIK3CA靶向药患者选择及判断预后,具有临床实用性。第二部分中国人非小细胞FGFR融合基因研究肺癌是世界范围内最常见的癌症致死原因,占所有肿瘤死亡病例的约18%。其中,非小细胞肺癌占所有肺癌的85%左右,大部分非小细胞肺癌患者在被发现时已为晚期从而失去手术根治的机会。随着对非小细胞肺癌遗传学研究的深入,针对特定驱动突变的靶向药物已被证明可以使肿瘤产生明显的消退,并显著延长患者无疾病生存期。近来,致癌融合基因如RET融合基因抑制剂凡德他尼(Vandetanib)和卡博替尼(Cabozantinib),ALK与ROS1融合基因抑制剂克唑替尼(Crizotinib)已被证明可有效治疗特定亚型的肺癌。但是,东亚人群中,仍然有30%的吸烟肺腺癌和88%的肺鳞癌尚没有明确驱动基因突变／融合。新近研究表明,成纤维细胞生长因子受体(FGFR)融合基因与肿瘤生成密切相关,靶向于FGFR的抑制剂有明显抗肿瘤作用并已进入前期临床试验。然而对非小细胞肺癌FGFR融合基因及与其他驱动基因关系的研究罕有报道,中国人非小细胞肺癌FGFR基因融合情况仍不十分清楚。弄清以上问题,将有利于了解中国人群FGFR融合基因现状并有助于FGFR靶向药物患者选择。本项研究第二部分回顾分析复旦大学附属肿瘤医院1328例临床非小细胞肺癌手术切除新鲜冰冻标本,提取RNA,逆转录为cDNA后进行RT-PCR。直接测序检测FGFR1,FGFR2,FGFR3基因融合情况,并分析患者EGFR.KRAs,HER2和BRAF突变、ALK、RET、RoS1融合基因情况以及患者临床病理特征。对研究中发现的FGFR融合基因突变标本与野生FGFR对照标本(连续收集自2011年7月至2012年12月的肺鳞癌样本),以免疫组织化学法(immunohi

很少 此网站 stochemical, IHC)检测FGFR1，FGFR2,FGFR3表达。研究发现,1328例非小细胞肺癌中有17例FGFR融合基因,其中15例为FGFR3-TACC3,2例为BAG4-FGFR1,并且与其他基因突变/融合不共存。有吸烟史(P3cm (P<0.001)患者更易出现FGFR基因融合,腺癌FGFR融合基因样本中多含实体亚型。FGFR融合基因状态与免疫组织化学表达呈正相关,FGFR基因融合与患者的总生存时间以及无复发生存时间无明显相关性。本课题的研究成果表明,中国人群中1.3%的非小细胞肺癌、3.50%的肺鳞癌中存在FGFR基因融合。肿瘤最大径大于3厘米的吸烟鳞癌患者更易出现FGFR融合基因。本课题的研究结果可以对临床肺癌癌基因驱动基因突变／融合筛选提供参考,有利于FGFR靶向药患者选择及判断预后,具有临床实用性。
研究背景肾细胞癌(renal cell carcinoma, RCC)是泌尿系统常见的恶性肿瘤,近年来发病率呈持续上升趋势,严重威胁人类生命健康。肾细胞癌常发病隐匿,约30%肾细胞癌在初次诊断时已发生转移。肾细胞癌对放化疗不敏感,根治性手术切除是其唯一有效的治疗方式,但是术后肿瘤复发转移率仍较高。肾细胞癌转移(metastatic renal cell carcinoma, mRCC)预后不良,5年生存率<0.001,P<0.001)；同时,肾细胞癌转移灶组织PIK3R1基因蛋白表达量亦显著低于肾细胞癌原发灶组织PDGR1蛋白表达量(P<0.001,P<0.001)。786-mut1和786-mut2细胞的PIK3R1基因蛋白表达量也降低。与野生型细胞相比,A-704-mutl和A-704-mut2细胞的PIK3R1基因mRNA的表达量亦均显著下降(P<0.001,P<0.

METHODS: Human embryonic stem cells (hESC) differentiated to cardiomyocytes (CM) using a p38 MAPK inhibitor (SB203580) based serum-free medium (SB media). Nutrient supplements known to increase cell viability were added

to SB medium. The ability of these supplements to improve cardiomyogenesis was evaluated by measurements of cell viability, total cell count, and the expression of cardiac markers via flow cytometry. 确认细节 An improved medium containing Soy hydrolysate (HySoy) and bovine serum albumin (BSA) (SupSB media) was developed and tested on 2 additional cell lines (H1 and Siu-hiPSC). Characterization of the cardiomyocytes was done by immunohistochemistry, electrophysiology and quantitative real-time reverse transcriptionpolymerase chain reaction. RESULTS: hESC cell line, HES-3, differentiating in SB medium for 16 d resulted in a cardiomyocyte yield of 0.07 ± 0.03 CM/hESC. A new medium (SupSB media) was developed with the addition of HySoy and BSA to SB medium. This medium resulted in 2.6 fold increase in cardiomyocyte yield (0.21

± 0.08 CM/hESC). The robustness of SupSB medium was further demonstrated Ruxolitinib订单 using two additional pluripotent cell lines (H1, hESC and Siu1, hiPSC), showing a 15 and 9 fold increase in cardiomyocyte yield respectively. The age (passage number) of the pluripotent cells did not affect the cardiomyocyte yields. Embryoid body (EB) cardiomyocytes formed in SupSB medium expressed canonical cardiac markers (sarcomeric α-actinin, myosin heavy chain and troponin-T) and demonstrated all three major phenotypes: nodal-, atrial- and ventricular-like. Electrophysiological characteristics (maximum diastolic potentials and action potential durations) of cardiomyocytes derived from SB and SupSB media were similar. CONCLUSION:

The nutrient supplementation (HySoy and BSA) leads to increase in cell viability, cell yield and cardiac marker expression during cardiomyocyte Selleck Lonafarnib differentiation, translating to an overall increase in cardiomyocyte yield.
目的探讨乳凝集素通过ERK、p38 MAPK信号通路对未成熟树突状细胞(iDCs)分泌白介素(IL)-12和IL-10的影响。方法脐带血中分离得到单核细胞,加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(50 ng/mL)和重组人白介素-4(10 ng/mL),同时按照不同组合加入乳凝集素(10μg/mL)和信号通路阻滞剂,诱导分化为iDCs。分组如下:①对照组;②乳凝集素组;③ERK通路阻滞组;④ERK通路阻滞剂+乳凝集素组;⑤p38MAPK通路阻滞组;⑥p38MAPK通路阻滞剂+乳凝集素组;⑦JNK通路阻滞组;⑧JNK通路阻滞剂+乳凝集素组。采用Western blotting检测ERK、JNK、p38MAPK蛋白磷酸化水平,ELISA法检测iDCs分泌IL-12和IL-10的变化。结果与对照组比较,乳凝集素组ERK蛋白磷酸化水平升高(P0.05),IL-12和IL-10的分泌量显著降低(P<0.05)。ERK通路阻滞组和ERK通路阻滞剂+乳凝集素组中ERK蛋白磷酸化水平几乎为零;ERK阻滞剂+乳凝集素组IL-12和IL-10的分泌量显著高于乳凝集素组(P<0.

05)；而第三周LIF组与假手术组比较及与PD组比较差异具有显著统计学意义(P0.05)。 2免疫荧光方法清楚显示：除正常对照组外,其余第3周三组小鼠脑组织内均出现免疫荧光阳性的内源性神经干细胞激活表达,均主要分布在核团周围。 3半定量RT-PCR方法显示：正常组、假手术组、LIF组、PD组实验后第1周及第2周GP130mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05);而第三周LIF组与假手术组比较及与PD组比较差异具有显著统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较差异也有统计学意义(P
髓样分化因子88(Myeloid Differentiation Factor88, MyD88)的经典作用是通过与TLR/IL-1R的TIR结构域相结合,引起NF-κB和丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinases, MAPKs)的活化,导致炎症因子的释放。近年的研究发现,MyD88在一些实质瘤的肿瘤细胞中表达增加,可能通过促炎症反应作用和非炎症作用促进肿瘤的进展。在本课题中,我们检测了MyD88在肝癌组织中的表达水平,分析了MyD88表达水平在肿瘤病人预后判断中的价值,利用体外实验和动物体内实验探讨了MyD88在肝癌细胞增殖和转移中的作用及其作用机制。

Talazoparib 通过对110例肝癌标本的癌组织和临近的癌旁组织免疫组织化学染色发现,MyD88在肝癌中的表达量增加：通过分析MyD88和临床指标之间的关系,证实MyD88的表达量和肝癌病人的临床病理分期、复发呈正相关；通过分析MyD88和肝癌病人预后之间的关系,证实MyD88表达量高的病人,预后比较差,统计学分析证实MyD88是一个独立的影响病人预后的因素。 为了研究MyD88对肝癌细胞增殖的影响,我们进行了平板克隆和裸鼠体内成瘤实验,实验证实MyD88可以促进细胞克隆数目的增加和裸鼠移植瘤的生长。为了研究MyD88对肝癌细胞凋亡的影响,我们进行了流式细胞术和TUNEL凋亡检测实验,流式检测证实MyD88可以抑制肝癌细胞的凋亡,这一实验结果在裸鼠移植瘤和肝癌标本中得到了进一步的验证。转移是恶性肿瘤的一种重要的生物学特征,也是肿瘤病人死亡的重要原因。为了研究MyD88对肝癌细胞转移的影响,我们进行了细胞迁移、侵袭实验和裸鼠体内成瘤实验,细胞迁移和侵袭实验证实MyD88可以增加肝癌细胞的迁移和侵袭能力,裸鼠体内成瘤实验证实MyD88可以促进裸鼠肺部转移灶的形成。综上所述,MyD88可以通过影响肝癌细胞的增殖、凋亡和转移水平来促进肝癌的进展。 为了研究MyD88在肝癌生长和转移中发挥作用的机制,我们进行了Real-time PCR、ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)、NF-κB荧光素酶活性分析、凝胶电泳迁徙率改变实验(EMSA)和Western Blotting实验,证实了MyD88除了可以通过依赖TLR/IL-1R信号通路调节肿瘤进展相关基因的表达和NF-κB的活性,也可以通过不依赖TLR/IL-1R信号通路调节肿瘤进展相关基因的表达和NF-κB的活性。为了研究MyD88不依赖TLR/IL-1R调节NF-κB活性的机制,我们进行了NF-κB荧光素酶活性分析实验,并给予了LY294002(PI3K/Akt抑制剂)、U0126(Erk1/2抑制剂)或者SB203580(p38抑制剂),实验表明MyD88可以通过PI3K/AKT和p38/ERK调节NF-κB的活性。同时,Western

Blotting实验证实MyD88可以通过不依赖TLR/IL-1R通路调节AKT和p38/ERK的活性。 总之,通过临床标本的分析,我们首次阐明了MyD88在肝癌中的高表达及其与病人预后不良之间的关系。通过体内外实验，我们阐明了MyD88可以通过影响肝癌细胞的增殖、凋亡和转移水平来促进肝癌的进展。通过对机制的探讨,我们阐明了MyD88可以不通过TLR/IL-1R信号通路调节NF-κB的活性以及肿瘤转移和发展相关基因的表达。我们的研究结果可望为肝癌病人预后判断以及肝癌的生物治疗提供了新靶点。
组织或器官纤维化是许多疾病致残、致死的主要原因,严重威胁着人们的健康与生命。目前针对纤维化病变的治疗手段极为有限,处于研究中的抗纤维化化合物很多,但进入临床的十分稀少。作用于多(?)点的吡非尼酮(PFD)的上市标志着抗纤维化药物的研究取得了很大挂展。因此,作用于多靶点纤维化药物的研究成为抗纤维化药物研究的重要发展方向。

PLX3397数据表 RAD001细胞系 吡非尼酮作用于纤维化过程不同环节中的多个靶点,是目前唯一以纤维化适应症上市的药物,课题组前期筛选到了吡非尼酮的ne-better药氟非尼酮(AKF-PD),已经完成临床前研究。由于强的首过作用,它们的作用强度均不够理想。鉴于该类化合物具有很好的临床应用前景,以此为基础的进一步研究具有重要意义。 本课题在前期研究的基础上,以保持吡非尼酮多靶点作用特点,(?)进代谢快的缺点为目标,设计了一系列新结构的化合物,以其获得(?)学和药动学方面性质优良的先导化合物,为开发新型抗纤维化药物提供候选化合物。并通过部分化合物的药效学研究,探讨高活性、多靶点作用的化合物结构特征,为抗纤维化药物的设计提供有价值的信息,为了解纤维化疾病的病理机制进行有益探索。 本课题以吡非尼酮为先导化合物,设计合成了苯基吡啶酮类化合(?)和苄基吡啶酮两个系列共52个吡啶酮类化合物。完成了目标化合物的结构确证,采用MTT法检测了目标化合物对NIH3T3细胞增殖的抑制活性。结果表明：设计的化合物活性均高于阳性对照药物氟非尼酮,选取4个化合物进行了大鼠体内活性测试和动物急性毒性实验,其中化合物3r与2j显示了很好的成药性 本课题初步归纳了设计合成的两系列吡啶酮类化合物抗纤维化活性的构效关系。结果表明：吡啶酮5-三氟甲基取代后活性明显升高；-苄基取代活性优于1-苯基取代；1位苯基取代基通过氨烷基链连接杂环后活性显著上升；苄基系列中杂环与苯环以氨丙基链连接为好,(?)位取代活性较高；而苯基系列苯环与杂环以氨乙基链连接为佳。在苯环上为非杂环取代的化合物中,侧链长短与活性关系不明显。 本课题在前期工作的基础上系统地合成了两个系列的吡啶酮类化合物,评价了目标化合物的抗纤维化活性,得到了2个成药性较好的化合物；本课题首次研究了吡啶酮类似物的抗纤维化活性构效关系,为进一步研究具有更高抗纤维化活性的新型多靶点化合物提供了重要信息和打下一了坚实基础。
目的：通过建立闭合性脑损伤动物模型,研究脑损伤后白细胞介素1β、丝裂原活化蛋白激酶p38及血管细胞间粘附分子-1在脑组织中的不同时相表达的特点及法医学意义。方法：将75只清洁级SD大鼠随机分成正常对照组、手术对照组及损伤后0.