05);所有正常细胞均未见染色体改变。 (2)CEP7、CEP8和CEP17三种探针在腺癌中的阳性率均高于在鳞癌和小细胞癌的阳性率

05);所有正常细胞均未见染色体改变。 (2)CEP7、CEP8和CEP17三种探针在腺癌中的阳性率均高于在鳞癌和小细胞癌的阳性率,但仅CEP8探针在腺癌中阳性率与其在小细胞癌的阳性率差异有统计学意义(P=0.044)。

(3)FOB细胞学诊断肺癌的敏感性为54.1%(33/61),若以CEP7、CEP8、CEP17任意一个探针阳性为M-FISH阳性,细胞学结合M-FISH可使诊断敏感性提高至80.3%(49/61),且不降低细胞学诊断的特异性(100.0%)。 2. EGFR和k-ras基因突变检测 (1)50例细胞学标本中,DNA提取的满意率为86.0%(43/50),其中42例有特异性PCR扩增产物可以进行测序。 (2) EGFR基因总突变率为33.3%(14/42)。其中第19外显子突变率为16.7%(7/42),第20外显子突变率为4.8%(2/42),第21外显子突变率为11.9%(5/42),未检出第18外显子突变。EGFR19和21外显子突变占EGFR突变总数的85.7%(12/14),显著高于EGFR20外显子突变(P=0.03)。 (3) EGFR女性突变率47.8%(11/23)显著高于男性(15.8%,3/19)(P=0.028);非吸烟患者突变率为53.3%(8/15)显著高于吸烟患者(22.2%,6/27)(P=0.040);腺癌患者突变率为38.7%(12/31),3例非肺癌患者未见EGFR基因突变。 (4) k-ras基因突变率为4.8%(2/42),均为第12号密码子替代突变。 (5)未发现EGFR基因突变与k-ras基因突变共存于同一病例。 结论 1.FOB细胞学液基薄片上可以建立与细胞形态相结合的M-FISH技术。FOB细胞学诊断的癌细胞、可疑癌细胞及非典型细胞均可发生7、8和17号染色体多体,此技术可能成为辅助FOB细胞学提高肺癌诊断敏感性的有效途径。 这个 2.采用细胞学标本进行EGFR和k-ras基因突变检测方法可行、结果可靠,对无法获得组织学标本的肺癌患者可以尝试采用细胞学标本进行检测。
肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)是一种多功能的蛋白。c-Met为HGF的受体,是一种原癌基因的蛋白产物。它是一种具有生长因子受体结构和功能性质的跨膜酪氨酸激酶。一旦结合至其配体,该受体发生自我磷酸化可刺激其内在的酪氨酸激酶活性,从而引起细胞的迁移、增殖和侵袭等行为的改变。已在多种人类的肿瘤中发现c-Met基因的过表达。HGF/c-Met通路已被证实影响着许多恶性肿瘤的发生和发展。在骨髓瘤病人的血清和骨髓中发现HGF浓度明显高于正常人,并且发现这跟病人的预后呈明显的负相关。之前有研究显示,c-Met及其配体HGF在多株骨髓瘤细胞系和原代骨髓瘤细胞中高表达。此外,有研究指出HGF可促进骨髓瘤细胞的增殖和迁移。

TEK kinase activty 综上,我们推测阻断HGF/c-Met信号通路也许对多发性骨髓瘤的治疗具有重要的意义。NK4是一种HGF的拮抗剂,由N末端的发夹结构和4个kringle结构域组成。NK4一旦结合至c-MET上,可竞争性拮抗HGF所诱导的c-MET酪氨酸磷酸化作用,从而抑制HGF所介导的细胞增殖、迁移和侵袭。此外,NK4还具有抑制成纤维细胞生长因子(BFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)所诱导的血管生成作用。NK4除了HGF拮抗活性外的抗血管生成活性可能与其结构类似血管抑制生长因子的4个kringle结构域有关。NK4这种具有抑制肿瘤细胞和肿瘤血管生成的多重功能,暗示了其在多发性骨髓瘤患者治疗的潜在价值。在本课题,我们初步探讨了Ad-NK4对多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226生物学行为的影响及可能的机制,旨在为NK4在多发性骨髓瘤治疗中的潜在临床应用提供理论基础和实验依据。 第一部分利用Gateway技术构建重组腺病毒pAd-NK4 研究目的:利用Gateway技术构建含人肝细胞生长因子(HGF)NK4基因的重组腺病毒载体。研究方法:以含有HGF/NK4基因的质粒为模板PCR扩增NK4基因,将回收的NK4PCR产物片段克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-6获得重组质粒pYr-adshuttle-6-NK4。从该重组质粒上,利用LR同源重组将NK4-IRES-EGPF表达框转移至腺病毒骨架质粒pAD/BL-DEST,获得重组腺病毒质粒pAd-NK4-IRES-EGFP。该质粒经pacI线性化后转染293包装细胞获得重组腺病毒rAd-NK4-IRES-EGFP。采用TCID50(Tissue cell infectious dosage50,TCID50)法测定重组腺病毒滴度。重组腺病毒分别经酶切和PCR等方法进行鉴定。荧光显微镜观察转染效果。研究结果:证实腺病毒载体中含有NK4基因的目的片段;病毒滴度为6.3×108PFU/ml;荧光显微镜发现该重组腺病毒能在HEK293细胞中高效的表达。结论:利用Gateway技术可以快速地构建同时表达NK4蛋白和绿色荧光的重组腺病毒,为下一步开展关于NK4基因的肿瘤治疗提供了基础。 Axitinib 第二部分Ad-NK4对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖的影响 研究目的:观察Ad-NK4对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖的影响及可能机制。研究方法:1.

Western blot和RT-PCR检测在转染Ad-NK4的RPMI8226细胞中NK4的表达。2.MTT法体外观察Ad-NK4对RPMI8226细胞增殖抑制作用。3. PI单染流式细胞仪检测Ad-NK4对RPMI8226细胞凋亡发生率的影响。4. DNA琼脂糖凝胶电泳实验验证Ad-NK4对RPMI8226细胞的诱导凋亡作用。5. Western blot检测Akt/mTOR通路主要执行蛋白、细胞周期调控蛋白及细胞凋亡相关蛋白的表达。研究结果:1.Ad-NK4转染的RPMI8226细胞组中NK4基因的表达明显高于对照组。2. Ad-NK4转染的RPMI8226细胞组在24、48和72小时的增殖抑制率分别为33.5%±1.21%、52.8%±1.63%和54.8%±1.77%(p<0.05)。另外,RPMI8226细胞与基质FN粘附实验显示:Ad-GFP组、Ad-NK4组、UO126作用组、RAPA作用组及AG490作用组对粘附的抑制率分别为0、46.2%、59.4%、7.7%和55.8%,其中Ad-NK4组、UO126作用组和AG490作用组对粘附的抑制率均明显高于未转染组(P0.05)。2.RPMI8226细胞与ECV304粘附实验显示:Ad-NK4组、UO126作用组、RAPA作用组及AG490作用组对粘附的抑制率分别为61.9%、58.8%、20.7%和54.1%,均明显高于未转染组(P0.05)。3.与未转染组或Ad-GFP组相比较,Ad-NK4组能明显降低RPMI8226细胞MMP-2、MMP-3和VEGF蛋白的表达水平(P0.05)。另外,Ad-GFP组和未转染组之间对MMP-2、MMP-3、MMP-7和VEGF蛋白的表达水平无明显差别(P>0.

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