012)。 结论：miR-34b影响肿瘤细胞的凋亡、增殖、转移,在肿瘤发展过程中发挥抑制肿瘤的作用；HGF-Met信号通路中p53磷酸化并增强转录活性,上调miR-34b,反馈抑制c-Met。由于p53信号通路参与细胞周期抑制与细胞凋亡,并于其中发挥重要作用,因此miR-34基因可能受到抑癌基因p53的调节,而p53可以通过miR34调节一系列的下游蛋白。另外,miR-34又可以反向作用于p53的mRNA,从而避免p53的连续激活。
背景

目前,肺癌的发病率仍呈逐渐升高的趋势,其死亡率居恶性肿瘤的首位。非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌的85%,其中约70%的患者确诊时已属晚期,化疗是主要的治疗手段,标准的化疗方案为含铂类的两联方案。其有效率仅为25%-35%左右,中位生存期为8-10个月,已经进入了瓶颈期。近几年来,分子靶向治疗成为了一个新的热点,对于某些特定类型的肺癌(如EGFR突变、EML4-ALK阳性)显示了较好的疗效,但这些药物迟早会发生耐药,如何克服耐药、寻找新的靶点以及研发新的药物,成为目前临床研究的热点。 目的 通过检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表皮生长因子受体(EGFR)和肝细胞生长因子受体(c-Met)的表达水平,探讨EGFR和c-Met蛋白表达与组织学类型及临床分期的关系。 材料与方法 收集郑州大学第二附属医院2010年2月-2011年8月经手术后病理检查确诊的60例非小细胞肺癌患者肿瘤组织蜡块,应用免疫组化、抗体抗原杂交法检测其组织中EGFR、c-Met的蛋白表达水平。 采用SPSS17.0统计分析软件进行统计学处理,采用χ2检验(检验水准设定为a=0.05),分析EGFR、c-Met免疫组化结果与组织学类型及临床分期的关系。 结果 1.肺鳞癌组织中EGFR的蛋白表达阳性率为12%(3/25),肺腺癌组织中EGFR的蛋白表达阳性率为80%(28/35),鳞癌组织中EGFR蛋白表达阳性率显著低于腺癌,,两者之间的差异性显著(P<0.01),影响c-Met蛋白表达的因素为分化程度、肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移情况以及TNM分期(P0.005)。 一般 结论 1.肺腺癌组织中EGFR和c-Met蛋白表达高于鳞癌 2.Ⅲ+Ⅳ期EGFR和c-Met蛋白表达高于Ⅰ+Ⅱ期 3. EGFR与c-Met双阳性表达越高可能肿瘤组织的恶性程度越高
目的：非小细胞肺癌(NSCLC)是当代世界常见恶性肿瘤之一，已居多数国家癌症死亡原因的首位。近些年来新的分子靶向药物表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）的出现为NSCLC的治疗带来了曙光。吉非替尼是一种口服的有活性、选择性的EGFR-TKIs，目前已成为肺癌分子靶向治疗中较为成熟的药物。临床研究已表明，吉非替尼单药治疗各种类型NSCLC的总有效率仅为10%～20%，因此人们希望与其他药物联合应用以进一步提高抗肿瘤效应。康莱特注射液是一种中药制剂，由中药薏苡仁中提取出的薏苡仁油制成,研究表明其对多种肿瘤细胞均能有较强的杀伤及抑制作用。一些小样本临床研究发现，康莱特联合化疗能显著提高晚期NSCLC的治疗效果。目前已有许多研究证明PI3K/Akt信号通路在NSCLC的发生、发展中起重要作用。约有50%-70%的NSCLC中存在Akt的磷酸化即p-Akt，这表明PI3K/Akt信号通路的激活在NSCLC中很常见。c-Met蛋白是一种由原癌基因c-Met编码、具有酪氨酸激酶活性的生长因子受体,可与肝细胞生长因子(Hepatocyte

以及 Gefitinib Growth Factor,HGF)特异性结合,激活下游一系列信号转导通路,调控细胞的增殖、活力、迁移、血管形成、侵袭以及形态发生等。c-Met信号的改变能促进肿瘤的发生和发展。有研究结果显示在NSCLC中非靶受体c-Met继发性过表达与吉非替尼的继发性耐药有关。本实验应用一系列实验方法，通过检测药物处理后的人肺腺癌A549细胞株中细胞凋亡率、p-Akt及c-Met的mRNA及蛋白等的表达来探索吉非替尼联合康莱特对A549细胞株的作用及其机制。

方法： 1体外培养肺腺癌A549细胞，选取对数生长期细胞进行实验。实验分为空白对照组，吉非替尼组，康莱特组，吉非替尼联合康莱特组；吉非替尼组设置浓度梯度为：0.1、0.5、1、5、10、20、40μmol L，作用时间：24h、48h、72h；康莱特设置浓度梯度为：5、10、20、40、80、100、160μl ml,作用时间：24h、48h、72h；联合用药组：根据康莱特抑制率求IC50，吉非替尼选择本实验中最高作用浓度；应用四甲基偶氮唑蓝（tetrzolium-based colorimetric assay，MTT）法分别测定各药物不同浓度、不同作用时间的抑制率。 2根据MTT结果，康莱特IC50=80μl ml，故联合用药组康莱特取80μl ml，吉非替尼选择本实验中最高作用浓度40μmol L，共同处理48h后，应用流式细胞学检测各处理组中对细胞生长的抑制情况。 3选取对数生长期细胞置入六孔板培养，组别设置同上。倒置显微镜下观察细胞形态学变化。采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（streptavidin-perosidase，SP）染色法检测各组药物处理后细胞内p-Akt、c-Met蛋白含量的变化。 4取对数生长期细胞，组别设置同上。药物作用48h后提取RNA，检测总RNA的量、纯度及完整性，通过逆转录-聚合酶链反应（reversetranscription PCR，RT-PCR）半定量检测药物处理后细胞内c-Met mRNA的表达水平。 5实验数据经SPSS18.0统计处理,采用正态性检验,以P0.