001);PP2A激动剂组不仅单轴突长度明显长于对照组(P<0.001),而且统计学结果显示30%神经元出现了多轴突(P<0.001),同时单轴突神经元减少(P0.05)或极性缺失;D-erythro-Sphingosine处理组神经元没有出现明显的多轴突形成(P>0.05),单轴突长度变化无统计学意义。然后将神经元培养24 h后共转染RFP(or GFP)/pcDNA4.0、RFP(or selleck激酶抑制剂 GFP)/PP2A wild type(wt)和RFP(or GFP)/PP2Adn培养48 h,固定做免疫荧光可见转染pcDNA4.0对照组神经元极性已经建立,大多数神经元有一个轴突和多个树突;PP2Awt组单轴突延长(P<0.01)同时多轴突增多(P<0.001);PP2Adn组多出现短小的突起(P
再灌注是目前急性心肌梗死最有效的治疗措施,但再灌注治疗同时带来再灌注损伤,可加速心肌细胞凋亡及坏死,引起的心肌梗死范围扩大,心律失常,心功能迅速恶化。如果能减少再灌注损伤,则可以改善急性心肌梗死患者的预后。2003年Vinten-Johans实验室[1]提出了后适应概念,即再灌注后立刻给予一次或多次短暂重复心肌缺血与再灌注,能提高心肌对之前发生的较长时间缺血的耐受性,减轻再灌注损伤保护心肌。
糖尿病是冠心病主要危险因素,急性心肌梗死糖尿病人群的死亡率也高于非糖尿病人群。因此研究糖尿病状态下心肌缺血后适应则有更大的意义。但遗憾的是目前关于糖尿病预适应的保护作用机制尚不清晰,而关于糖尿病后适应的心肌保护作用国内尚无报道。 本实验以高脂饮食和STZ诱导建立2型糖尿病大鼠模型,与正常大鼠对照,通过Langendorff离体心脏缺血再灌注模型,研究后适应对于正常大鼠以及2型糖尿病模型的心肌保护作用。研究结果表明后适应对于正常大鼠离体心脏有明显的心肌保护作用并证明PI3K-AKT信号通道在后适应的心肌保护作用机制中起主导作用。相反后适应对于2型糖尿病大鼠离体心脏无心肌保护作用且证明后适应糖尿病心肌保护作用减弱的原因与AKT激活磷酸化不足有关。
目的:在观察人多囊肾组织中β-catenin的分布及其表达差异的基础上;探讨新型PPARγ激动剂DH9对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞(WT9-12)的增殖抑制作用;并比较罗格列酮研究其对细胞中β-catenin表达和激活的影响,以阐明其作用机制。方法:采用免疫组化比较ADPKD病人及ADPKD动物模型PKDV/V小鼠肾组织与相应正常肾组织中的β-catenin的分布和表达的差异,并予不同浓度的DH9及罗格列酮干预WT9-12细胞24、48、72、96小时后,用MTT法测定其细胞增殖抑制率。运用Western
blotting技术分析经DH9单干预或分别与GSK3β抑制剂SB216763、蛋白酶体抑制剂MG132以及PPAR-γ抑制剂GW9662共干预WT9-12细胞后,细胞内β-catenin、磷酸化β-catenin、GSK3β、磷酸化GSK3β、cyclinA、P21 CIP/WAF1、Bax、Bcl-2等蛋白表达的改变,同时以RT-PCR技术分析DH9对WT9-12细胞β-catenin MS-275浓度 mRNA表达的影响。依赖流式细胞术和Annexin V + PI双染色流式细胞术分别观察其对细胞周期和细胞凋亡率的影响。结果:正常肾组织小管上皮细胞β-catenin的分布主要在胞膜处,胞核及胞浆少见;肾囊肿衬里上皮细胞中β-catenin失去正常主要分布在胞膜处的特征,代之以胞浆和核内表达明显增多,表明存在核转位增强。DH9抑制WT9-12细胞增殖作用明显优于罗格列酮(P0.05)。DH9对WT9-12细胞中β-catenin mRNA水平无明显影响,但可下调WT9-12细胞中β-catenin蛋白表达水平,且在加入MG132及SB216763共干预后可逆转DH9对WT9-12中β-catenin的下调作用。DH9可增加P21
CIP/WAF1的蛋白合成,减少cyclin A蛋白的合成,使细胞阻滞在S期。DH9作用72小时后Bcl-2/ Bax的比值较对照组显著下降(P
目的:在离体大鼠心脏缺血-再灌注损伤模型上,研究不同浓度的利多卡因对七氟醚后处理心肌保护作用的影响。 方法:应用Langendorff灌注系统,建立离体大鼠全心心肌缺血40min再灌注60min损伤模型,测定心室力学指标和复灌各时点冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。实验结束测定心肌梗死面积。将48个心脏随机分为6组(n=8):缺血(ISCH)组,七氟醚后处理(SPC)组,七氟醚后处理+浓度分别为2、10和20μg/ml的利多卡因处理(SPC+Lid-2,SPC+Lid-10和SPC+Lid-20)组,以及10μg/ml利多卡因处理(Lid-10)组。 结果:与ISCH组相比,七氟醚后处理使心肌梗死面积从47.3±5.6%减少到18.6±3.1%(p＜0.05),降低了复灌期流出液中LDH的含量,明显改善心室力学指标,增加了冠脉流量。20μg/ml的利多卡因取消了七氟醚后处理的心肌保护作用。 GSK1120212细胞系 结论:超治疗剂量的利多卡因可以阻断七氟醚后处理的心肌保护。
目的:肝脏的缺血再灌注常见于诸多临床事件中,如肝切除术、肝移植术等。本文应用GSK-3的抑制剂氯化锂来保护肝脏在缺血再灌注时肝细胞的凋亡,并探索其中机制。 方法:应用体外缺复氧模型模拟肝脏缺血再灌注的环境。将小鼠正常肝细胞AML-12细胞分为正常氧含量组、缺复氧组、及不同浓度的氯化锂预处理2小时后缺复氧组后造8小时缺复氧模型,用MTT法检测细胞活性,Annexin V法检测细胞的凋亡;DCFDA探针检测细胞内的活性氧的变化;JC-1探针检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测细胞中GSK-3、JNK的磷酸化程度、线粒体内外的细胞色素C含量变化和活化后的caspase-3的含量变化。 结果:与缺单纯复氧组比较,用10mM氯化锂预处理组能够明显减少由缺复氧导致的AML-12细胞的凋亡(P
目的 探讨线粒体ATP敏感钾通道(mitoKATP)和线粒体膜电位(Δψm)在支气管哮喘气道平滑肌细胞中对PKCα信号转导途径和细胞增殖的影响。 方法 以SD大鼠为实验动物,随机将36只雄性大鼠平均分为正常组和哮喘组,以腹腔注射和雾化吸入卵白蛋白法制备大鼠哮喘模型。取大鼠气道平滑肌细胞,分为六组进行干预:A.正常对照组;B.正常+diazoxide(mitoKATP特异性开放剂)组;C.