近期研究表明Aurora-A可促进肿瘤放化疗抵抗,由于Aurora-A与p53, BRCA1, BRCA2等多种DNA损伤应答蛋白有着相互作用,因此我们推测Aurora-A很可能通过调节DNA损伤应答促进肿瘤放化疗抵抗。 研究目的： 研究Aurora-A与DNA损伤应答的关系,揭示Aurora-A促进肿瘤放化疗抵抗的机理,探寻Aurora-A相关肿瘤的新Everolimus售价型靶向药物分子,以期达到肿瘤治疗的最佳效果。 材料和方法： 第一部分.观察Aurora-A对细胞增殖的影响。 1).在乳腺癌、胰腺癌和卵巢癌细胞中选择Aurora-A低表达的细胞系(MCF-7,PANC-1和OVCA420),和Aurora-A高表达的细胞系(MDA-MB-231, BXPC3和OVCA429),通过反转录病毒法因为转入或沉默Aurora-A。 2).通过细胞计数和软琼脂克隆形成试验分别绘制细胞生长曲线和克隆形成率柱状图。 3)用流式细胞术检测细胞周期进展。 第二部分.检测Aurora-A对肿瘤放化疗抵抗的影响。 1).用放射线,顺铂或者Aurora-A抑制剂VX680处理细胞后,通过流式细胞术检测细胞凋亡水平。 2).用MTT检测顺铂处理AZD2281供应商后的细胞活力,并计算细胞半数抑制浓度(IC50)。 第三部分.探究Aurora-A引起肿瘤放化疗抵抗的机理 第一章.检测Aurora-A与DNA损伤应答的关联 1).免疫荧光检测Aurora-A与γH2AX的关联。 2).免疫印迹检测Aurora-A对DNA损伤应答蛋白(ATM, Chk2, ATR, Chk1, RAD51,H2AX,γH2AX,ERCC2,p53,pp53, AKT1, AKT2)的影响。