而三维培养提供的空间结构和生长环境可模拟体内的情况,能更真实地反映细胞-细胞间和细胞-基质间的相互作用。本实验室已在体外成功构建了复方壳多糖组织工程皮肤,在此基础上建立黑素瘤的体外三维培养模型,对于研究恶性黑素瘤的生物学特性以及进行药物疗效评价更具优势。目前多种不同的黑素瘤细胞株已被分离培养,并用于黑素瘤的生物学特性研究,本研究使用的A375细胞具有较强侵袭能力,是皮肤黑素瘤细胞株中Fulvestrant细胞系具有代表性的一种。 肉桂醛是一种醛类有机化合物,除了作为食品添加剂外,也具有抗真菌、抗病毒和抗肿瘤等医药效应。本实验首先在二维培养条件下观察了肉桂醛对人皮肤黑素瘤A375细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,然后在实验室原有组织工程皮肤的基础上加入A375细胞,建立黑素瘤三维培养模型,进一步检测了肉桂醛在三维培养条件下对A375细胞增殖和侵袭的影响。本研究方法、结果和BGB324浓度结论分述如下: 方法: 1、A375细胞体外扩增,贴壁生长近融合后,在培养基中分别加入0(对照组)、10、20和40μM肉桂醛溶液,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,ELISA、western blot法检测VEGF表达水平,明胶酶谱法检测MMP-9分泌水平,细胞划痕实验检测细胞迁移,transwell实验检测细胞侵袭情况。 2、将A3Fludarabine供应商75细胞加至复方壳多糖胶原凝胶的支架内行三维培养,在培养基中分别加入0(对照组)、10、20和40μM肉桂醛溶液,MTT法检测细胞增殖情况, ELISA、western blot法检测VEGF表达水平,明胶酶谱法检测MMP-9分泌水平。 3、分别在组织工程皮肤基质表面和基质中接种A375细胞,进行气-液面交界培养或浸没培养,HE染色观察A375细胞生长情况,选择最合适的接种方式和培养方法,以便构建符合体内实际情况的黑素瘤三维培养模型。