研究褐藻多糖对人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THP1分泌sFlt-1的影响。 2.研究褐藻多糖对人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THPl诱导的血管生成的影响。 3.研究sFlt-1在褐藻多糖影响人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THPl诱导的血管生成过程中的作用。 或者 4.研究褐藻多糖影响人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THP1分泌sFlt-1的相关机制。 研究方法 1.褐藻多糖对人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THP1分泌sFlt-1的影响。 取生长良好的T98G和THP1细胞以每孔105个细胞加入6孔细胞培养板,12h后加入不同浓度的褐藻多糖(终浓度分别为10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml),继续培养6h,12h,24h。刺激结束后收集条件刺激上清行ELISA检测sFlt-1的表达水平。

2.褐藻多糖对人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THP1诱导的血管生成的影响。 T98G细胞和THP1细胞经褐藻多糖(100μg/ml)刺激24h后取细胞培养上清进行HUVEC成管功能试验。96孔板每孔铺基质胶70μl,每孔加入等量细胞悬液和条件上清的混合液200μl,每孔细胞数105个,6h后显微镜下拍照记录。取每孔三个视野内分散的内皮细胞形成的管状结构问分叉点的数目的平均值对成管能力进行定量计算。 3. sFlt-1在褐藻多糖影响人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THP1诱导的血管生成过程中的作用。 T98G细胞和THP1细胞经褐藻多糖(100μg/ml)刺激24h后取细胞培养上清进行HUVEC成管功能试验。设对照组,药物刺激组和抗体处理组。药物刺激组为药物刺激后的细胞培养上清,对照组为未经药物刺激的细胞培养上清中加入与刺激量相同的褐藻多糖,抗体处理组为在药物刺激后的细胞培养上清中加入2μ

g/ml的sFlt-1特异性阻断抗体并室温孵育0.5h。96孔板每孔铺基质胶70μl,每孔加入等量细胞悬液和条件上清的混合液200μ l,每孔细胞数105个,6h后显微镜下拍照记录。取每孔三个视野内分散的内皮细胞形成的管状结构间分叉点的数目的平均值对成管能力进行定量计算。 4.褐藻多糖影响人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THP1分泌sFlt-1的相关细胞因子和机制。 点击此处 1)T98G细胞和THP1细胞经褐藻多糖(100μg/ml)刺激24h后收集细胞提取mRNA,逆转录后行Real-time PCR检测sFlt-1mRNA的表达。 2)T98G细胞和THP1细胞经褐藻多糖(100μg/ml)刺激24h后收集细胞行流式细胞术检测细胞膜上VEGFR1的表达。 结果 1.褐藻多糖对人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THP1分泌sFlt-1的影响。在24h作用时间下,随着药物浓度的增高,T98G细胞和THP1细胞的sFlt-1的分泌水平均呈逐渐升高的趋势。选择100μg/ml的作用浓度,随着作用时间的延长,T98G细胞和THP1细胞的sFlt-1的分泌水平均呈逐渐升高的趋势。

2.褐藻多糖对人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THP1诱导的血管生成的影响。褐藻多糖能够明显抑制T98G胶质瘤细胞和THP1单核细胞诱导的血管生成。对成管能力的定量分析也进一步明确了褐藻多糖对T98G胶质瘤细胞和THP1单核细胞诱导的血管生成具有显著的抑制作用。 3. sFlt-1在褐藻多糖影响人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THP1诱导的血管生成过程中的作用。与对照组相比,褐藻多糖刺激后(100μ g/ml,24h)的T98G细胞条件培养上清和THP1单核细胞条件培养液上清明显抑制了HUVEC的成管能力,经sFlt-1特异性抗体的免疫性清除后其成管能力有显著的恢复,达到与对照组相当的水平。对成管能力的定量分析进一步明确了这一作用。 4.褐藻多糖影响人脑胶质瘤细胞T98G和人单核细胞THP1分泌sFlt-1的相关机制。 1)褐藻多糖刺激后的T98G胶质瘤细胞的sFlt-1mRNA水平显著升高,THP1单核细胞的sFlt-1mRNA水平无明显变化。 2) VEGFR1在T98G细胞膜表达量极少,褐藻多糖对此无影响。褐藻多糖显著降低了THP1细胞膜上VEGFR1的表达。 寻找更多 结论 1.褐藻多糖促进人脑胶质瘤细胞系T98G和人单核细胞系THP1分泌sFlt-1。 2.褐藻多糖抑制人脑胶质瘤细胞系T98G和人单核细胞系THP1诱导的血管生成。 3.sFlt-1介导褐藻多糖对人脑胶质瘤细胞系T98G和人单核细胞系THP1诱导的血管生成的抑制作用。 4.褐藻多糖促进人脑胶质瘤细胞系T98G中sFlt-1的转录。 5.褐藻多糖促进人单核细胞系THP1细胞膜上VEGFR1的降解。
机体pH值的稳定对于细胞正常功能的维持至关重要。在生理环境下，细胞通过H+的多种转运途径保持细胞外和细胞内的pH值稳定在7.3–7.0左右。在一些病理条件如炎症、缺血和肿瘤发生过程中，由于组织无氧糖酵解产生乳酸和ATP水解的H+积聚，导致体液pH值急剧下降。研究表明低pH值是类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)关节部位发生炎症反应的主要特征之一，在严重的RA疾病中，pH值甚至降低至5.