研究慢病毒介导的Bcl-2基因RNAi联合TRAIL基因表达对于淋巴瘤细胞生长抑制、凋亡诱导作用,评价Bcl-2基因表达下调和TRAIL表达上调抗淋巴瘤生长的协同效应,探索携带TRAIL基因和Bcl-2shRNA的重组慢病毒对淋巴瘤细胞的旁观者效应。 主要内容： 第一部分：慢病毒表达载体pWPI-trail/bcl-2-shRNA的构无建 方法： 1.将bcl-2-shRNA寡核苷酸片段退火,产物插入pLL3.7慢病毒表达载体mU6启动子下游,筛选阳性菌落,构建pll-bcl-2-shRNA慢病毒表达载体。 2.提取人胎盘组织总RNA, RT-PCR扩增TRAIL cDNA,克隆至pGM-T克隆载体,筛选阳性菌落,酶切及测序鉴定pGM-T-Gemcitabine细胞系trail的构建；将TRAIL基因从pGM-T-trail克隆载体上切下,并克隆至pWPI慢病毒表达载体EF-1α启动子下游(IRES-GFP上游),筛选阳性菌落,构建pWPI-trail慢病毒表达载体。 3.从pll-bcl-2-shRNA质粒上获取mU6/bcl-2-shRNA表达盒,克隆至pWPI-trNSC 683864 花费ail质粒EFl-α启动子上游,筛选阳性菌落,构建pWPI-trail/bcl-2-shRNA慢病毒表达载体。 结果： 1.酶切鉴定及测序显示pll-bcl-2-shRNA慢病毒表达载体构建成功。 2.酶切鉴定及测序显示pGM-T-trail构建成功；酶切鉴定显示pWPI-trail慢病毒表达载体构建成功。 3.酶切鉴定显示pWPI-trail/bcl-2-shRNA慢病毒表达载体构建成功。