方法1 收集AML患者骨髓血及健康捐献者外周血标本,分离其中的单个核细胞,收集AML细胞系的细胞团块,提取总RNA,检测BTK m

方法1.收集AML患者骨髓血及健康捐献者外周血标本,分离其中的单个核细胞,收集AML细胞系的细胞团块,提取总RNA,检测BTK m RNA表达。同时收集患者包括疾病诊断时间,年龄,性别,初发时的外周血白细胞数,血红蛋白量,血小板计数,骨髓原始细胞比例,染色体核型,基因突变类型,治疗方案,治疗效果,生存时间等临床资料。分析健康捐献者和AML患者BTK表达差异,并根据BTK的表达水平,一般将AML患者分组,使用Kaplan-Meier方法和对数秩检验绘制并比较生存时间曲线。2.用新型BTK抑制剂,口服小分子药物Abivetinib处理急性髓细胞白血病细胞系及原代AML患者细胞,检测其对AML细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测药物对细胞的凋亡及周期阻滞作用。并比较AML细胞对Abivertinib及传统BTK抑制剂Ibrutinib的敏感性差EPZ015938分子量异。同时收集药物作用后的AML细胞,并用western blot等验证药物作用后凋亡相关蛋白、周期相关蛋白、BTK及其下游通路蛋白,常见肿瘤增殖相关信号通路蛋白的改变。对AML细胞进行基因干扰(RNAi)处理后观察AML细胞对Abivertinib敏感性变化以探索其作用机制。3.将Abivetinib及HHT单药或联合作用于AML细胞系及原代病人细胞,检测GSK1838705A说明书其生长抑制作用,计算联合指数。收集单药及联合药物作用后的细胞,流式细胞术检测药物对细胞的凋亡及周期阻滞作用,并用western blot等验证药物作用后凋亡相关蛋白、周期相关蛋白、BTK及肿瘤增殖相关信号通路蛋白的改变。4.收集6例使用“VA”(Venetoclax+阿扎胞苷)治疗方案的AML患者的骨髓单个核细胞标本进行RNA-sequence测序,其中3例患者获得了完全缓解(CR),3例患者不缓解(NR),根据结果分析出差异表达的基因。

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