基于根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的方法实现异养蛋白核小球藻快速遗传转化,并优化转化条件。结果表明,小球藻异养生长条件的碳氮组合配比为葡萄糖20 g/L和酵母粉2 g/L时,生长速率为自养的3～5倍;根瘤农杆菌GV3101和LBA4404均可成功实现对异养小球藻的遗传转化,且转化效率无显著性差异(P>0.05)。最优转化条件Cl-amidine核磁为根瘤农杆菌GV3101初始OD_(600 nm)值=0.8,小球藻(Chlorella pyrenoidosa)浓度为10~7个/m L,各取100μL混合涂布在pH=5.4、乙酰丁香酮浓度为200μmol/L的CM平板上,24℃避光培养40 h后转到筛选平板,仅2 d转化子便清晰可见,数目达88个/10~6微藻。转化过程整体耗时仅5 d,普遍比ZD1839自养微藻转化时间缩短3倍以上,为小球藻代谢工程改造提供技术手段,同时为其他可异养培养微藻的短时高效遗传转化提供科学依据。
目的化学遗传精准激活愤怒情绪相关核团下丘脑腹内侧核腹外侧区(VMHVL),探究其对大鼠心肌梗死后心脏功能的影响。方法 10只健康成年SD大鼠随机分为激活组(n=5)和对照组(n=5)。通过脑立体定位技术向激活组大鼠大点击此处脑右侧VMHVL微量注射rAAV-hSyn-hM3D(Gq)-EGFP-WPRE-pA,在对照组相同的脑区注射等量的rAAV-hSyn-EGFP-WPRE-pA。注射病毒3周后,两组大鼠均开胸进行心脏左前降支结扎术构建心肌梗死模型,连续14 d腹腔注射氯氮平一氧化氮3.3 mg/kg,激活成动转染病毒的VMHVL神经元。14 d后,检测心脏二维超声心动图,取静脉血检测血清去甲肾上腺素浓度,取VMHVL脑冰冻切片作免疫荧光染色。