但Hirsutine抗肺癌作用及分子机制尚不明确。因此,本课题拟进一步明确Hirsutine是否具有选择性抗肺癌作用,并阐明其具体作用机制。一、Hirsutine选择性诱导肺癌细胞凋亡CCK8法和流式细胞术检测发现Hirsutine可诱导肺癌A549和NCI-H1299细胞凋亡增加,呈现良好的量效和时效关系,Western blot检测发现HirSelleck Nepicastatsutine可诱导凋亡相关蛋白C-PARP和C-Caspase 3表达增加。但Hirsutine对人正常肝细胞LO2、人正常胚肺细胞WI-38几乎没有毒性。提示Hirsutine可能具有高效、低毒的抗肺癌效应。二、Hirsutine诱导肺癌细胞线粒体损伤电镜观察到Hirsutine作用后线粒体呈现空泡化、肿胀和内嵴紊乱,还有提示Hirsutine可能诱导了线粒体损伤。JC-1染色显示Hirsutine可显著下调线粒体膜电位且具有良好量效关系。荧光素酶法ATP检测试剂盒检测到Hirsutine可显著下调ATP的产生。DCFH-DA染色法流式检测发现Hirsutine可诱导细胞ROS产生增加。Western blot检测Cyto C从线粒体释放selleck screening library到胞浆增加。Calcein-AM/CoCl_2染色法发现Hirsutine可诱导线粒体渗透性转换孔(MPTP)开放,免疫沉淀和MPTP开放抑制剂Cyclosporin A的应用确认Hirsutine诱导了环亲和素D(cyclophilinD,CypD)和腺苷酸转运体(adenine nucleotide translocase 1,ANT1)直接结合,从而促使MPTP孔开放,导致线粒体损伤途径细胞凋亡。